人胚胎肝脏细胞表型特征分析及肝脏前体细胞的克隆化培养

摘要

目的研究体外胚胎期人肝脏细胞（FLCs）的表型特征并利用克隆培养法获得肝脏前体细胞。方法用免疫荧光染色和流式细胞仪测定FLCs的抗原表达;采用克隆化培养法结合不同生长因子组合的培养基对FLCs进行单细胞克隆筛选,用克隆环分离各单克隆细胞,扩大培养后应用逆转录聚合酶链反应法测定不同克隆mRNA的表达。用SPSS12.0软件单因素方差分析不同培养基配方克隆形成率。结果原代分离培养的FLCs呈非典型的上皮细胞形态、大小不均一,其肝脏前体细胞标志物甲胎蛋白、白蛋白、细胞角蛋白8和细胞角蛋白19的阳性率分别为28.1%、84.7%、55.1%和9.1%;造血干细胞标志物CD34和CD45的阳性率为0.04%和0.09%;间质细胞标志物CD105和CD166的阳性率分别为71.8%和75.3%。采用克隆化培养法获得的细胞克隆形态有一定差异,多数克隆由长梭形细胞组成,部分由形状不规则、胞体较铺展的细胞组成,少数克隆具有类上皮细胞形态。对可连续传代5次的19个细胞克隆进行RT-PCR分析结果显示,表皮细胞黏附分子、甲胎蛋白、白蛋白和细胞角蛋白19的阳性率分别为52.6%,21.1%,52.6%和84.2%。结论原代培养的FLCs是混杂有多种类型细胞的异质性群体,克隆培养法可以获得肝脏前体细胞克隆。