miR-155通过靶向调控TGFBR1和TGFBR2抑制AMI诱导的心肌纤维化

摘要

目的探讨miR-155对急性心肌梗死(AMI)小鼠心肌纤维化进程及心肌成纤维细胞(CFs)细胞增殖和周期的影响,分析miR-155对转化生长因子(TGF)-β信号Ⅰ型/Ⅱ型跨膜受体(TGFBR1/TGFBR2)调控作用,阐明miR-155在AMI中的作用及其工作机制。方法qRT-PCR检测miR-155在AMI患者和AMI小鼠血清中的表达。心脏超声,Masson染色和天狼星红染色分别检测miR-155对AMI小鼠左室射血分数及心肌纤维化程度的影响。Western印迹检测CFs细胞在缺氧条件下miR-155对TGFBR1,TGFBR2,P-smad2和P-smad3表达的影响。TargetScan和双荧光素酶报告基因试验筛选并验证TGFBR1和TGFBR2是否为miR-155的靶基因。qRT-PCR和Western印迹检测miR-155对TGFBR1和TGFBR2表达的影响。CCK8法和流式细胞法分别检测miR-155对CFs细胞增殖和周期的影响。结果miR-155在AMI患者及AMI小鼠血清中的表达均明显降低,miR-155过表达能促使AMI小鼠左室射血分数升高,下调心肌组织中NPPA表达,抑制心肌纤维化进程。miR-155可使TGFBR1和TGFBR2的3′-非编码区(UTR)特异性结合并负性调控两者的表达。上调miR-155表达能抑制CFs细胞的增殖和S期阻滞,下调miR-155表达则产生相反的效果。miR-155能抑制缺氧诱导的TGFBR1和TGFBR2蛋白及smad2和smad3的磷酸化水平,但过表达TGFBR1/TGFBR2能逆转miR-155的调控效果。结论miR-155可能通过靶向调控TGFBR1和TGFBR2表达抑制smad信号通路,从而抑制CFs细胞的增殖和S期阻滞,影响AMI小鼠的纤维化进程。