微小RNA-1243直接靶向丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2调节甲状腺乳头状癌TPC-1细胞迁移

摘要

目的观察微小RNA（miRNA,miR）-1243调节丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（Akt1）和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2（Akt2）在人甲状腺乳头状癌细胞TPC-1中的表达及对细胞迁移的影响。方法利用TargetScan和miRanda对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞株的miR-1243靶基因进行预测,采用双荧光素酶报告基因验证miR-1243对靶基因的直接调控。Western blot检测miR-1243对Akt1和Akt2蛋白表达的调节。迁移小室（Transwell）检测1×10~5个对数生长期的TPC-1细胞的迁移能力。结果 TargetScan和miRanda软件预测显示Akt1和Akt2基因是miR-1243的潜在靶基因。双荧光报告基因的相对荧光值显示,与空载体组和突变组比较,分别共转染miR-1243模拟物的Akt1或Akt2野生型组荧光素酶活性显著下降（t=3. 595,P=0. 009）,而空载体组和突变组的荧光素酶活性差异无统计学意义（t=1. 655,P=0. 213）。与对照处理组比较,miR-1243模拟物处理组显著抑制而miR-1243抑制物处理组促进TPC-1细胞Akt1和Akt2蛋白水平的表达（t=4.810,P=0. 018）,而内参基因蛋白水平均无明显变化（P=0. 235）。Transwell实验结果显示,miR-1243模拟物转染组迁移细胞数[（9. 83±3. 51）个]低于对照模拟物处理组[（18. 67±4. 24）个],差异均有统计学意义（t=2. 692,P=0. 039）。与对照抑制物处理组比较[（21. 33±5. 35）个],miR-1243抑制物转染组迁移细胞数[（37.17±7. 33）个]显著增加（t=2.472,P=0.022）。结论 miR-1243通过靶向抑制Akt1和Akt2的表达进而调节TPC-1细胞迁移。