黑色素瘤相关抗原-A3蛋白激活树突状细胞诱导CD8+细胞毒性T淋巴细胞免疫治疗肝细胞癌

摘要

目的探讨黑色素瘤相关抗原-A3（MAGE-A3）蛋白激活树突状细胞（DC）,然后诱导产生CD8+细胞毒T淋巴细胞（CTL）进行免疫治疗肝细胞癌（简称肝癌）的效果。方法利用MAGE-A3蛋白诱导DC成熟并检测DC表面标志物及白细胞介素（IL）-10、IL-12表达,然后利用成熟的MAGE-A3-DC诱导MAGE-A3特异性CD8+CTL,并检测MAGE-A3-DC-CD8+CTL对正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2的杀伤作用。建立BALB/c-nu/nu肝癌模型,检测MAGE-A3-DC-CD8+CTL对小鼠肿瘤的抑制作用,并通过病理学切片观察肿瘤组织变化。结果 MAGE-A3蛋白刺激能够显著上调DC表面标志物DC80、DC83、DC86和人类白细胞抗原DR基因（HLA-DR）水平（97.45±2.58比48.33±1.68,92.81±2.36比52.92±1.90,94.00±3.01比53.97±2.05,92.16±1.87比34.13±1.32;t=35.680,P=0.013;t=29.440,P=0.021;t=24.580,P=0.012;t=56.690,P=0.009）;与磷酸盐缓冲液（PBS）刺激的DC比较,MAGE-A3蛋白能够显著促进DC释放IL-12[（338.44±18.15）pg/ml比（243.23±16.56）pg/ml;t=8.670,P=0.005]和显著抑制IL-10的释放[（207.21±10.89）pg/ml比（327.58±14.36）pg/ml;t=14.930,P=0.009]。MAGE-A3-DC-CD8+CTL和DC-CD8+CTL展示了相近的L02细胞杀伤效果[（9.10±1.40）%比（9.71±1.58）%;t=0.650,P=0.120],与DC-CD8+CTL比较,MAGE-A3-DC-CD8+CTL展示了显著的HepG2细胞杀伤效果[（5 8.84±5.27）%比（9.63±1.61）%;t=19.970,P=0.008]。BALB/c-nu/nu肝癌小鼠经过MAGE-A3-DC-CD8+CTL治疗后,肿瘤体积比显著低于PBS组和DC-CD8+CTL组（5.43±1.22比21.81±2.01比22.85±2.40;t=22.030,P=0.010;t=20.460,P=0.012）。苏木素-伊红（HE）染色结果显示,经过MAGE-A3-DC-CD8+CTL处理的肿瘤组织细胞核固缩,细胞间隙增大,出现空泡和水肿现象,而PBS组和DC-CD8+CTL组肿瘤组织无病理学改变。结论MAGE-A3蛋白能够刺激DC细胞成熟并诱导产生MAGE-A3蛋白特异性CD8+CTL,MAGE-A3-DC-CD8+CTL具有特异性的肿瘤杀伤能力。