人脂肪干细胞源外泌体对HaCaT细胞损伤修复及迁移功能影响的初步实验研究

摘要

目的初步探究人脂肪干细胞源外泌体对表皮细胞迁移功能的影响。方法从正常人抽脂手术中获取的脂肪组织分离培养脂肪干细胞, 采用超速离心和超滤结合的改良法分离收集细胞上清液中的外泌体, 采用透射电镜、动态光散射法以及Western印迹法鉴定分离出的外泌体。采用0、50、100、200、250、300、400、500、600、800 μmol/L H2O2分别作用HaCaT细胞1 h, CCK8法检测H2O2对HaCaT细胞存活率的影响。将HaCaT细胞分为正常组（无预处理）和损伤组（用100 μmol/L H2O2损伤预处理0.5 h）, 再将两组分别分为对照组和治疗组, 治疗组与外泌体共培养, 对照组不与外泌体共培养。用共聚焦荧光显微镜观察PKH26荧光标记的外泌体是否能被细胞吞噬, 用划痕实验观察HaCaT细胞修复率, 用Transwell实验评估细胞迁移能力。多组间比较采用单因素方差分析, 两组间比较采用LSD检验, 相关性检验采用Spearman检验。结果透射电镜观察显示, 分离所得的脂肪干细胞源外泌体是直径60 ～ 80 nm的茶托样纳米囊泡, 而动态光散射法测量显示, 分离的外泌体纯度为65.88%, 表达CD63、Alix和TSG101, 具有外泌体的基本特征。CCK8法显示, 0 ～ 800 μmol/L H2O2处理HaCaT细胞1 h后细胞存活率呈逐渐降低趋势, H2O2浓度与HaCaT细胞存活率呈负相关（r = -0.91, P ＆ 0.01）。共聚焦荧光显微镜观察, 分离的外泌体能被损伤后的HaCaT细胞摄入。划痕实验显示, 正常对照组、正常治疗组、损伤对照组、损伤治疗组HaCaT细胞12 h划痕面积修复率分别是40.26% ± 0.64%、69.57% ± 0.69%、32.28% ± 0.31%、69.62% ± 1.68%, 损伤治疗组显著高于损伤对照组（t = 37.33, P ＆ 0.01）。Transwell实验结果显示, 4组10倍视野下迁移细胞数分别是20.85 ± 4.84、44.8 ± 5.24、14.95 ± 2.58、40.05 ± 7.66, 损伤治疗组大于损伤对照组（t = 25.10, P ＆ 0.01）。结论人脂肪干细胞源外泌体具有促进氧化应激损伤的HaCaT细胞迁移的能力。