人甲母质细胞无血清原代培养方法的建立

摘要

目的建立人甲母质细胞无血清原代培养方法。方法甲母质组织来自9例2016年1 - 12月在北京大学深圳医院行截指（趾）术与甲床修整术的患者。采用无血清DEME/F-12培养基于37 ℃、5% CO2条件下培养组织块2 ～ 3 d, 换无血清的角质形成细胞生长（CnT-07）培养基培养原代甲母质细胞, 显微镜下观察培养过程中的细胞形态。以角蛋白5（K5）、角蛋白10（K10）为标记, 采用免疫荧光鉴别培养获得的细胞, 流式细胞仪分析细胞纯度。结果培养2 ～ 3 d时, 有细胞沿组织块爬出, 在第10天左右, 形成了大的细胞团块, 部分细胞形态为上皮样细胞, 呈铺路石样排列, 部分呈扁平状, 形态为纺锤形或星形。免疫荧光示, 部分细胞可同时表达K5与K10, 证明甲母质细胞的存在。K10阳性细胞约占37.6%。结论采用组织块培养法结合无血清培养基可成功培养出人原代甲母质细胞, 体外培养的人甲母质细胞可同时表达K5与K10。