马尔尼菲青霉总RNA提取方法的比较

摘要

＜正＞马尔尼菲青霉是一种双相型真菌,在25℃表现为菌丝相,37℃为酵母相。近几年随着免疫缺陷患者逐渐增多,马尔尼菲青霉感染也逐年增多,流行区域不断扩大。RNA是遗传信息的携带者,提取高质量的RNA是在分子水平上进行马尔尼菲青霉致病性研究的基础。我们将Rneasy Plant Mini试剂盒、Trizol、改良的异硫氰酸胍法、RNAex试剂分别应用于马尔尼菲青霉总RNA的提取,以找出一种方便、快速的方法,为其分子生物学的研究打下良好的基础。一、材料与方法（一）菌株：马尔尼菲青霉SUMS0152,由本真菌室从一2岁的血液病患儿血液中分离（经形态学及DNA序列证实）,在沙氏培养基（SAD）上定期传代保存。（二）试剂：①Rneasy Plant Mini试剂盒（德国Qiagen公司）。②Trizol（美国Invitrogen公司）。③改良的异硫氰酸胍法：变性液：4 mol/L异硫氰酸胍,5 g/L十二烷基肌氨酸钠,0．75 mol/L柠檬酸钠,二巯基乙醇。3 mol/L NaAC（乙酸钠,pH 5．2）,2 mol/L NaAC（pH4．0）,水饱和酚/氯仿/异戊醇（25∶24∶1）。④RNAex Reagent（上海华舜生物有限公司）。其他：0．1%DEPC（焦碳酸二乙酯）水,异丙醇、无水乙醇等为国产分析纯。