反向斑点杂交技术快速鉴定泌尿生殖道致病性支原体的研究

摘要

目的建立PCR反向斑点杂交方法（PCR-RDB）快速鉴定泌尿生殖道常见致病性支原体。方法以4种支原体[微小脲原体（Up）、解脲脲原体（Uu）、生殖支原体（Mg）、人型支原体（Mh）]的16SrRNA基因为靶序列设计通用引物和探针,将4种特异的寡核苷酸探针固定于尼龙膜上。利用巢式PCR扩增Up、Uu、Mg和Mh,扩增产物变性后与各特异性探针进行杂交、显色并分析结果,并对检测体系的敏感性、特异性进行测试。同时检测分析60例临床拭子标本。结果4种特异性探针只与相应的支原体DNA杂交,与其他病原体无交叉反应,其敏感性是1 CFU。60例临床拭子标本PCR-RDB方法共筛选出支原体阳性19例,其中3例为支原体混合感染的标本（Up+Uu 2例,Uu+Mg 1例）。结论该方法可快速、敏感、准确地鉴定引起泌尿生殖道感染的致病性支原体。