TAP1-EGFP和TAP2-EGFP融合蛋白在恶性黑素瘤细胞系中的表达

摘要

目的探讨pTAP1-EGFP和（或）pTAP2-EGFP转入恶性黑素瘤细胞株后TAP表达的变化,观察TAP在A375中表达后的亚细胞定位。方法在恶性黑素瘤细胞株A375中转入pTAP1-EGFP和（或）pTAP2-EGFP,G418筛选稳定转染细胞株,检测转染后TAP1和TAP2表达水平的变化。将pDsRed2-ER和pTAP1-EGFP或pTAP2-EGFP共转染入A375细胞内,激光共聚焦显微镜下观察TAP1-EGFP和TAP2-EGFP融合蛋白的亚细胞定位。流式细胞仪检测转染前后细胞表面HLA-Ⅰ的表达。结果将pTAP1-EGFP和（或）pTAP2-EGFP转染A375细胞株后筛选出稳定克隆。转染pTAP1-EGFP和（或）pTAP2-EGFP后能明显增加A375细胞TAP1和TAP2在蛋白水平的表达,并能增加细胞表面HLA-Ⅰ的表达。共转染pDsRed2-ER和pTAP1-EGFP或pTAP2-EGFP后,在激光共聚焦显微镜下观察,发现TAP1-EGFP和TAP2-EGFP融合蛋白的绿色荧光能够与pDsRed2-ER的红色荧光重叠。结论构建的pTAP1-EGFP和（或）pTAP2-EGFP质粒在A375细胞系中表达成为TAP1～EGFP和TAP2-EGFP融合蛋白后,能准确定位在内质网上,为研究TAP诱导的后续免疫效应提供基础。