短发夹RNA干扰STAT3基因对恶性黑素瘤细胞A375生物学行为的影响

摘要

目的研究短发夹RNA（shRNA）沉默STAT3基因表达对人恶性黑素瘤细胞A375增殖和凋亡的作用。方法设计和构建靶向STAT3基因有小发夹结构的正义和反义寡核苷酸,退火后克隆人psiRNA-hHlneo质粒,使用脂质体转染A375。实验分为对照组、空载体组和STAT3转染组。通过RT-PCR和Western印迹检测A375细胞中STAT3基因mRNA和蛋白表达水平,MTT比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期分布,观察细胞凋亡。结果 STAT3转染组A375细胞STAT3 mRNA和蛋白表达水平（分别为0.2136±0.0626、0.8214±0.0430）明显低于对照组（0.7826±0.0701、3.1693±0.0846）和空载体组（0.8518±0.0783、3.2180±0.0780）,P值均＜0.01。STAT3转染24、48、72 h组的细胞增殖抑制率明显增高（分别为21.35%±2.12%、32.52%±2.64%、40.40%±3.08%）,与正常对照组（1.39%±0.53%、3.05%±1.16%、4.41%±1.42%）、空载体组（2.63%±1.38%、5.84%±2.47%、10.32%±2.48%）比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）。流式细胞仪检测显示,STAT3转染组细胞的凋亡率（81.06%±2.10%）较对照组（26.28%±0.47%）和空载体组（27.31%±1.05%）明显增高,差异有统计学意义（P＜0.01）。细胞周期分析显示,STAT3转染组G0/G1期细胞比例（68.43%±4.00%）增高,S期细胞比例（17.40%±2.05%）降低,与对照组（分别为60.07%±2.47%、28.40%±2.09%）及空载体组（分别为60.29%±2.26%、27.34%±3.63%）相比,差异有统计学意义（P＜0.01或＜0.05）。结论针对STAT3基因的特异性小RNA干扰质粒能够下调STAT3基因和蛋白表达,抑制A375的增殖能力,诱导细胞凋亡。