MiR-486-3p在银屑病皮损的表达及对角蛋白17表达的影响

摘要

目的探讨银屑病患者皮损与健康人皮肤中miR-486-3p表达情况及其对角蛋白17（K17）表达的调控作用。方法采用生物信息学方法预测出调节K17表达的微RNA（microRNA）,选取10例银屑病患者皮损和10例健康人皮肤提取RNA,用加PolyA尾法逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）进行荧光定量。用miR-486-3p模拟物（mimics）和阴性对照物（NC）转染人永生化角质形成细胞（HaCaT细胞）,Western印迹检测K17表达情况;构建双荧光素酶报告系统,其中包括含有K173’UTR的片段,突变1组为将种子序列删除的片段,突变2组为将种子序列间隔突变的片段,突变3组为将种子序列重复2次的片段,并检测miR-486-3p是否与K17 3’UTR种子序列结合而抑制K17表达。结果银屑病皮损中miR-486-3P表达水平为0.211±0.120,低于健康对照的0.555±0.425,银屑病皮损为健康对照的0.380,两组比较,t=2.62,v=9,P＜0.05。Western印迹结果显示,miR-486-3p类似物转染HaCaT细胞后,K17表达水平明显降低。双荧光素酶报告系统检测结果 ,含有K173’UTR种子序列组与突变3组荧光强度分别为65.31±6.32和54.18±10.01,均低于对照组（P＜0.05）;突变1组和突变2组荧光强度分别为114.77±16.14和110.21±12.99,与对照组差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 miR-486-3p在银屑病皮损中的表达水平低于健康人皮肤,miR-486-3p通过与K17 3’UTR种子序列结合抑制K17表达,提示其表达水平降低及对K17调控作用的改变可能与银屑病的发生与发展相关。