沙眼衣原体pORF5质粒蛋白抑制肿瘤坏死因子α诱导HeLa细胞凋亡

摘要

目的探讨沙眼衣原体质粒蛋白pORF5对肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导HeLa细胞凋亡的影响。方法将含pORF5基因的慢病毒重组表达载体与辅助质粒共转染293T细胞制备慢病毒, 慢病毒收集浓缩后再感染HeLa细胞, 流式细胞仪分选获得pORF5基因稳定转染细胞株（pORF5-HeLa）, 同时建立空载体转染对照细胞株（对照HeLa）。将两种细胞株分别分为两组, 一组用20 μg/L TNF-α处理（处理组）, 一组仅用新鲜培养基培养（未处理组）, 作用6 h, Hoechst33258染色观察凋亡细胞形态, 流式细胞仪检测细胞凋亡率, 实时PCR检测凋亡相关蛋白Caspase3、Bcl-2和Bax mRNA表达水平, Western印迹检测Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果 TNF-α处理细胞6 h后, Hoechst33258染色发现pORF5-HeLa和对照HeLa细胞中均可见不同程度的核固缩、碎裂, 高亮蓝色凋亡小体;pORF5-HeLa细胞的凋亡率为（35.5 ± 4.5）%, 对照HeLa细胞凋亡率为（63.6 ± 5.8）%, 均显著高于相应未处理组[（9.5 ± 1.5）%和（7.9 ± 0.9）%, t值分别为13.53、32.36, 均P ＆ 0.01]。处理组pORF5-HeLa细胞中Bax和Caspase3 mRNA表达水平较处理组对照HeLa细胞分别降低72.8%和84.5%（t值分别为35.29, 42.25, 均P ＆ 0.01）, 但Bcl-2 mRNA的表达水平显著高于处理组对照HeLa细胞（t= 87.12, P ＆ 0.01）。处理组pORF5-HeLa细胞中Bax蛋白表达水平亦显著低于处理组对照HeLa细胞（t= 17.58, P ＆ 0.01）, 而Bcl-2蛋白表达水平较对照HeLa细胞增加6.8倍, 差异有统计学意义（t= 18.93, P ＆ 0.01）。结论 pORF5可能通过增强抗凋亡蛋白Bcl-2降低促凋亡蛋白Caspase3和Bax的表达, 抑制TNF-α诱导的HeLa细胞凋亡。