体外诱导沙眼衣原体持续性感染对宿主细胞凋亡的调控

摘要

目的探讨阿奇霉素诱导持续性感染下沙眼衣原体对Hela229细胞凋亡的调控作用。方法沙眼衣原体感染Hela229细胞22 h后, 加入含0.08 mg/L阿奇霉素的DMEM培养液继续培养至感染48 h, 构建持续性感染细胞模型, 以不含阿奇霉素的DMEM培养液培养构建急性感染细胞模型。感染48 h后, 去除阿奇霉素继续培养进行沙眼衣原体复活试验。免疫荧光和电镜检测技术验证持续性感染模型。将沙眼衣原体急性感染和持续性感染的Hela229细胞用星状孢子素处理4 h诱导凋亡后, 用Hoechst 33258染色和膜联蛋白V-碘化丙锭流式细胞仪检测宿主细胞凋亡, 以未感染Hela229细胞为对照。结果加入阿奇霉素后, 沙眼衣原体感染的细胞内形成异形包涵体, 其内为畸形网状体。去除阿奇霉素继续培养至96 h, 沙眼衣原体包涵体内见具有感染性的原体。Hoechst染色显示, 经星状孢子素诱导细胞凋亡, 持续性感染的细胞染色质疏松, 而无沙眼衣原体感染的细胞染色质浓缩。在感染24 h时诱导凋亡, 持续性感染组和急性感染组细胞凋亡率分别为45.567% ± 2.631%和38.567% ± 1.701%, 两者差异有统计学意义（t = 2.686, P = 0.028）, 持续性感染组与未感染组（69.800% ± 2.835%）差异有统计学意义（t = 8.187, P ＆ 0.001）。在感染48 h时诱导凋亡, 持续性感染和急性感染组细胞凋亡率分别为46.700% ± 5.257%和61.767% ± 1.815%, 两者差异有统计学意义（t = 5.781, P ＆ 0.001）;持续性感染组与未感染组（68.667% ± 3.156%）差异有统计学意义（t = 7.421, P ＆ 0.001）。结论阿奇霉素诱导沙眼衣原体持续性感染可调控宿主细胞凋亡, 且作用持久至48 h。