中波紫外线辐射剂量与HaCaT细胞凋亡时相的相关性研究

摘要

目的探讨中波紫外线（UVB）辐射角质形成细胞后,UVB辐射剂量与角质形成细胞凋亡时相的相关性。方法以20,40,60,80,100和120 mJ/cm2的UVB辐射永生化人角质形成细胞株HaCaT 细胞,检测辐射后2,12,24,48和72 h的细胞活性和细胞周期的变化,以及代表不同时相的凋亡通路:即应用广谱Caspase抑制剂VAD-FMK与凋亡细胞中活化的Caspase不可逆的结合检测早期Caspase介导的凋亡;应用Annexin V及PI双染方法检测后发的细胞膜介导的凋亡;以及应用DNA的梯度凝胶电泳检测晚期细胞核介导的凋亡。结果UVB辐射可使HaCaT细胞的细胞周期受滞于G2/M期,G2/M期的百分比与辐射剂量成正比。细胞活性于24 h后与辐射剂量成反比。各时相的凋亡率均与辐射剂量成正比,但凋亡通路有明显的时相性:即早期（48 h内）由Caspase和细胞膜介导凋亡为主,晚期（48 h后）则由细胞核介导凋亡为主。结论UVB诱导的角质形成细胞凋亡具有显著的剂量与时相依赖性特征。宜对其进行多指标、多时相的检测。