咖啡酸衍生物WSY6对黑素细胞氧化应激损伤的保护作用及机制研究

摘要

目的探讨咖啡酸衍生物WSY6对过氧化氢（H2O2）诱导的黑素细胞氧化损伤的保护作用和潜在分子机制。方法体外培养原代人表皮黑素细胞, 分为对照组（不做任何处理）、H2O2组（1 mmol/L H2O2处理）和6.25、12.5、25 μmol/LWSY6组（分别用6.25、12.5、25 μmol/L WSY6预处理1 h后再用1 mmol/L H2O2处理1 h）。继续培养24 h后, 用MTS法测定黑素细胞存活率, 乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测LDH释放量。部分黑素细胞分为抑制剂组（用p38抑制剂预处理1 h, 再用1 mmol/L H2O2处理1 h）和H2O2组（直接用1 mmol/L H2O2处理1 h）, 处理完成后继续培养24 h, 用试剂盒检测LDH的释放量。部分黑素细胞用25 μmol/L WSY6预处理1、2、4 h后, 再用H2O2处理1 h, 流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平;部分黑素细胞用6.25、12.5、25 μmol/L WSY6处理1 h后, 再用H2O2处理1 h, Western印迹法检测细胞色素C（cyto-c）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）、caspase-9和磷酸化丝裂原活化的蛋白激酶（p-p38 MAPK）、细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）及c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）的表达。结果与对照组相比, H2O2组黑素细胞存活率明显降低（29.22% ± 1.31%, P ＆ 0.05）, 细胞内LDH释放量增加（47.19% ± 4.85%, P ＆ 0.05）, ROS水平明显升高（18.37 ± 1.59, P ＆ 0.05）, caspase-3和caspase-9的表达亦均升高。与H2O2组相比, 6.25、12.5、25 μmol/L WSY6组细胞存活率明显增加（52.48% ± 1.17%、60.21% ± 0.25%、78.32% ± 1.73%, P ＆ 0.05）, LDH释放量明显下降（21.99% ± 0.22%、15.38% ± 0.45%、13.18% ± 0.38%, 均P ＆ 0.05）, 25 μmol/L WSY6处理1、2、4 h组细胞内ROS显著下降（7.59 ± 1.00、6.22 ± 0.52、5.15 ± 0.48, 均P ＆ 0.05）。同时p38抑制剂组黑素细胞LDH释放量较H2O2组显著下降（P ＆ 0.05）。Western印迹法显示, WSY6预处理后, 与H2O2组相比, caspase-3和caspase-9表达明显降低, p-p38表达下降, 但p-ERK和p-JNK表达无明显变化;同时WSY6组p38 MAPK下游产物p-p53表达也下降, 且WSY6浓度越高, 下降越明显。结论 WSY6对H2O2诱导的黑素细胞氧化应激损伤有显著的保护作用, 可能通过p38 MAPK途径发挥作用。