小鼠Notch1胞外段高抗原区编码基因的克隆与表达

摘要

目的:克隆小鼠Notch1胞外段高抗原区编码基因,并进行原核表达及蛋白纯化,为制备mNotch1的单克隆抗体做准备.方法:计算机分析小鼠Notch1全长,PCR扩增其胞外段高抗原区编码基因,克隆入载体T-vector进行序列测定,然后将测定正确的片段连入GST融合表达载体pGEX-4T-1,得到pG-NEF,转化宿主菌DH5α,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,以及新生条带表达形式分析以后,用GST亲和层析柱纯化.结果:小鼠Notch1分子胞外段近膜处约170个氨基酸区域抗原性较高,PCR扩增得到大小约500bp的特异性片段,序列测定结果与文献报导的完全一致;原核表达产物大小约Mr 43×103,以包涵体形式存在,约占总蛋白的25%,纯化后目的蛋白含量>95%.结论:成功地进行了小鼠Notch1胞外段高抗原区编码基因的基因克隆、原核表达及蛋白纯化.