人牙本质基质蛋白1基因启动子的克隆、测序和活性分析

摘要

目的:克隆并测定牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1,Dmp1)基因上游启动子的序列,观察其不同片段在人牙髓干细胞(human dental pul pstem cells,HDPSCs)中的启动子活性,为进一步研究Dmp1基因的转录调控特点和分析特异性转录位点奠定基础.方法:以人全基因组DNA为模板,通过PCR方法获得目的片段,将其连接到Pkey-TA载体进行测序,并对所获得的序列进行生物学信息分析.将不同启动子片段构建至报告基因载体pGL3-Basic中,瞬时转染至牙髓干细胞,荧光素酶检测启动子活性并进行分析.结果:从人全基因组中获得2.2kb大小的目的片段,测序结果与基因组相应序列吻合.酶切鉴定表明不同长度启动子报告基因载体构建成功.荧光素酶分析结果显示:不同片段的Dmp1启动子在牙髓干细胞中活性不同,-505～-193区为Dmp1启动子的核心启动子区.结论:成功克隆到Dmp1上游启动子的序列,该启动子区在牙髓干细胞中具有活性,为研究Dmp1基因在成牙本质细胞分化和牙本质矿化中转录调控机制奠定了基础.