大鼠颌突外胚间充质细胞向骨骼肌细胞诱导分化和三维培养观察

摘要

目的:探讨体外诱导外胚间充质细胞向骨骼肌细胞分化的潜能,利用分化细胞构建组织工程骨骼肌模型.方法:取妊娠10.5 d胎鼠颌突外胚间充质细胞,纯化后分别在含1、5、10 mL/L体积浓度二甲基亚砜的DMEM/F12培养基中培养.相差显微镜下观察细胞的形态变化,成肌相关因子免疫组化鉴定细胞性质,将诱导后的细胞种植于胶原膜,并于培养3、6 d后用光镜、扫描电镜观察细胞的生长情况.结果:培养3 d后,外胚间充质细胞形态出现成肌样细胞变化,细胞变得大而扁平,培养5 d后细胞出现管样结构.免疫组化鉴定显示:添加二甲基亚砜后,大部分细胞出现成肌相关因子的表达,其中5 mL/L实验组效果最好,约75%的细胞转化为骨骼肌细胞.对照细胞形态未见明显改变,免疫组化鉴定未能诱导分化出骨骼肌细胞.种植于BAM膜后,细胞生长良好,并可形成复层结构.结论:二甲基亚砜可诱导外胚间充质细胞向骨骼肌细胞分化,最佳浓度为5 mL/L;在BAM膜上分化细胞生长状态良好,说明该生物可降解膜是构建组织工程骨骼肌的适合材料.