牙龈卟啉菌菌毛FimA基因高效植物表达载体的构建

摘要

目的: 构建果实特异启动子驱动的含牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA基因的高效植物表达载体,并进一步提高抗原基因的表达世和免疫原性,为研制有效的转基因植物牙周炎疫苗打下基础.方法: 以提取的番茄基因组DNA为模板扩增番茄果实特异表达启动子E8的核心序列(约1.11 kb),同时合成通过接头连接的霍乱毒素B亚基和FimA(266～337)(约600 bp),并通过SOE PCR,即重叠区扩增基因拼接法(gene splicing by overlap extension)将两者拼接,拼接后的序列为EF.用EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ分别双酶切EF序列及表达载体pCAMBIA1302,连接转化,得到的重组质粒pCAMBIA1302-EF用电击法转化根癌农杆菌GV3103.结果: 重组质粒经PCR和酶切鉴定证明已成功转化.结论: 本研究成功构建了番茄果实特异性启动子驱动FimA基因,以CTB为黏膜免疫佐剂的高效植物表达载体.