青光安颗粒剂对TGF-β1诱导的HTFs增殖影响的实验研究

摘要

目的探讨青光安颗粒剂抑制转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导的人类Tenon 成纤维细胞(HTFs)增殖的可能机制。方法从接受青光眼滤过手术(GFS)的个体获得人结膜下Tenon 胶囊样品。实验设计分为3 组:对照组(HTFs 未经处理,n = 10);TGF-β1 诱导组(100 ng/ ml TGF-β1 诱导HTFs,构建GFS 术后细胞模型,n = 10);TGF-β1+青光安治疗组(TGF-β1 诱导+青光安颗粒剂血清处理HTFs,n = 30)。TGF-β1+青光安治疗组按照青光安血清的剂量进一步分为3 组:TGF-β1+青光安高剂量组(TGF-β1 诱导+青光安颗粒剂血清5 ml处理HTFs);TGF-β1+青光安中剂量组(TGF-β1 诱导+青光安颗粒剂血清2.5 ml 处理HTFs);TGF-β1+青光安低剂量组(TGF-β1 诱导+青光安颗粒剂血清处理1 ml HTFs);每组设10 个培养皿。通过CCK-8 检测青光安对TGF-β1 诱导HTFs 增殖的影响;通过流式细胞术评估青光安对细胞周期的影响;通过Cyto-ID 免疫细胞化学染色测定青光安颗粒剂对HTFs 细胞自噬的影响;采用RT-PCR 和Western Blot 法测定自噬体形成的必需蛋白质Beclin-1,ATG-5 和LC3-Ⅲ基因和蛋白的表达水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t 检验。结果青光安能够抑制TGF-β1 诱导HTFs 的增殖能力,TGF-β1+青光安高剂量组细胞增殖水平(13.52±1.24)较TGF-β1 诱导组(23.42±1.25)降低,差异有统计学意义(F = 12.347,P < 0.01);TGF-β1 诱导G0/ G1 期的比例(88.29±0.35)降低,而S 期的比例(9.04±0.25)升高,而青光安治疗能够导致G0/ G1 期的比例(91.18±1.04)增加,而S 期的比例(5.41±0.59)降低,差异有统计学意义(F = 13.857,P < 0.01);与TGF-β1 诱导组相比,用TGF-β1+青光安治疗组导致荧光染色强度(1.84±0.14)降低,HTFs 阳性细胞数目(112.46±12.11)减少,差异有统计学意义(F =12.347,P = 18.472);TGF-β1+青光安治疗组能抑制TGF-β1 诱导对自噬基因Beclin-1、ATG-5 和LC- 3 Ⅲ mRNA 和蛋白质表达增加(P < 0.05)。结论青光安颗粒剂抑制TGF-β1 诱导的HTFs增殖,且可能机制为青光安诱导HTFs 细胞周期停滞于G0/G1 期,而且青光安可减少TGF-β1 诱导的HTFs 自噬。