轮状病毒VP4*高聚体的制备及其免疫保护性评价

摘要

在前期工作中发现,截短的轮状病毒VP4*蛋白(aa 26-476)在大肠杆菌中能够以可溶形式表达,且在小鼠模型中具有较高的免疫原性和免疫保护性.本研究通过颗粒化进一步提高VP4*蛋白的免疫保护性.通过37℃水浴加热处理24 h使VP4*蛋白多聚化,通过高效液相色谱、透射电镜、分析超离等分析VP4*蛋白颗粒化程度,通过酶联免疫吸附试验分析颗粒化对VP4*蛋白与中和抗体反应性的影响;通过差示量热法分析VP4*高聚体的热稳定性;最后,通过小鼠母传抗体模型研究颗粒化对VP4*免疫原性和免疫保护性的影响.结果 表明,VP4*蛋白高聚体结构均一,并且相比三聚体,具有更高热稳定性和中和抗体结合活性;在内毒素＜20 EU/mg的条件下,与铝佐剂混合,刺激小鼠产生更高滴度的中和抗体;对轮状病毒导致的腹泻具有更高的免疫保护性.综上所述,VP4*高聚体的研究为轮状病毒基因工程亚单位疫苗的研制提供了更广阔的思路.