蛋白激酶Cδ的克隆表达纯化及其在药物先导化合物筛选中的初步应用

摘要

蛋白激酶C家族是一类磷脂酰丝氨酸依赖丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶.PKCδ(蛋白激酶Cδ)是蛋白激酶C家族成员.PKCδ的异常激活将会导致糖尿病和多种癌症的发生,因此,PKCδ的特异性抑制刺能成为治疗这些疾病的潜在药物,如能以PKCδ为分子靶点来筛选特异性抑制剂,就可以建立癌症及糖尿病的药物先导化合物筛选模型.通过RT-PCR的方法,克隆了鼠源的PKCδ,并构建了哺乳动物细胞表达载体,获得了可稳定表达PKCδ的COS1细胞株.通过亲和吸附的方法获得了较为纯净的PKCδ,并对酶学活性作了进一步的分析,建立了以PKCδ为靶点的药物先导化合物筛选模型.