靶向UPP合成酶的抗耐药性粪肠球菌药物筛选及其抗菌机制探究

摘要

目的筛选耐万古霉素粪肠球菌UPP合成酶(EfaUPPS)的特异性抑制剂,以期获得作用于该靶点的抗耐万古霉素粪肠球菌药物先导化合物。方法克隆并表达耐万古霉素粪肠球菌UPP合成酶,建立酶活力测定方法,通过比较化合物的最小抑菌浓度(MIC)、半数抑制浓度(IC_(50))、解离常数(K_(d)),并利用分子对接等方法对化合物进行活性评价和抗菌机制探讨。结果从老药库中筛选出了甲状腺激素类似物替拉曲可(tiratricol),发现其对EfaUPPS酶活力有中等强度的抑制效果,IC_(50)值为25.13μmol/L,由MST测得的K_(d)值为166±6.8μmol/L,对耐药性粪肠球菌的MIC值为16μg/mL。米氏方程的双倒数分析证明tiratricol是EfaUPPS的竞争性抑制剂,分子对接结果显示该化合物可能结合在EfaUPPS的底物结合口袋入口处,阻碍底物进入活性中心。结论甲状腺激素类似物tiratricol对EfaUPPS有中等程度的抑制活性,对其抗菌机制的深入理解将为抗耐药菌新型抗生素的设计提供新的思路。