基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌δ-毒素的应用

摘要

目的 本研究采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)检测δ-毒素,评估其在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分型和毒力表达中的作用.方法 使用Bruker microflex MALDI-TOF仪器,采集2000～20000Da质量范围内,以正线性模式采集图谱,使用仪器配套的MALDI Biotyper 2.0软件分析MRSA菌株的原始图谱,产生的峰列表直接使用flexAnalysis、clinProTools3.0软件分析.结果 本研究中共检测83株MRSA,共有39(47.0％)株MRSA检出(3005±5)m/z信号峰,其中HA-MRSA 19(22.9％)株,CA-MRSA 20(26.5％)株,P=0.766,两者之间无显著性差异;33(39.8％)株MRSA检出(3035±5)m/z信号峰,其中HA-MRSA 9(10.8％)株,CA-MRSA 24(28.9％)株,P=0.003,两者之间有显著性差异;11(13.％)株MRSA既未检出(3005±5)m/z信号峰也未检出(3035±5)m/z信号峰,全部为HA-MRSA菌株.spa分型中检出(3005士5)m/z信号峰,15(18.1％)株为t062型,8株为t015(9.6％)型,4株为t030(4.8％)株,P=0,有显著性差异;检出(3035±5)m/z信号峰,31(37.3％)株为t437型,2(2.4％)株t8660型,P=0,有显著性差异;(3035±5)m/z作为spa t437型特征信号ROC曲线下面积0.89,P=0.11株未检出δ-毒素,6株分离自骨关节标本,3株分离自呼吸道标本,1株分离自慢性溃疡的分泌物标本,1株分离自血液;在血平板的菌落特征,6株MRSA菌落形态发生改变,5株菌落形态正常.结论 MALDI-TOF MS使用常规方法即可快速检测MRSA的δ-毒素,其质谱峰为(3005士5)m/z和(3035±5)m/z两种;(3035±5)m/z是δ-毒素的同基因变异体(HldG10S)的质谱峰,该峰可快速鉴别spa t437型;不产生δ-毒素的菌株是agr调控系统失调的表现,与慢性感染、小菌落形成、无明显β-溶血有关.