硫霉素产生菌卡特利链霉菌A520基因文库的构建

摘要

以大肠杆菌／链霉菌穿梭柯斯质粒pKC505为载体，构建了卡特利链霉菌（Streptomyces cattleya)A520在大肠杆菌DH1的基因文库，重组质粒插入外源片段的概率在95％以上，插入外源片段的大小为20－30kb，以链霉菌染色体分子量为104kb计算，由4000个转化子构成的基因文库可以概括卡特利链霉菌A520的99％的基因组，用已经克隆的硫霉素环化酶基因上游的1．5kb DNA片段作为探针杂交，从基因文库得到32个阳性克隆，用利波曼链霉菌（S.lipmanii)中的IPNS基因作为探针杂交，从基因文库得到1个阳性克隆pKW201/DH1，并为Southern杂交进一步证实交片段在BamH 12.7kb片段上，用来自带小棒链霉菌（S.chavuligerus)的克拉维酸生物合成途径中的环化酶基因 cs2作为探针杂交进行筛选，得到1个阳性克隆 pKW301/DH1，说明所构建的基因文库比较完整，并为进一步研究硫霉素产生菌卡特利链霉菌A520中抗生素生物合成基因打 下良好基础。