人体β-防御素-3突变基因的构建及在大肠埃希菌中的融合表达

摘要

目的 从人正常皮肤组织中提取β-防御素-3基因进行定点突变后在E.coli中融合表达.方法 从人正常皮肤组织中提取总RNA,经RT-PCR扩增得到编码β-防御素-3成熟肽的cDNA序列,测序正确后,寻找合适的突变位点,设计含突变位点的引物,用PCR重叠延伸法对β-防御素-3成熟肽cDNA序列进行定点突变,将突变产物克隆至pUC18进行序列测定及在E.coli中融合表达.结果 测序结果表明,经RT-PCR所得的β-防御素-3成熟肽序列与GeneBank中报道的编码人β-防御素-3成熟肽的cDNA序列完全一致.经过突变β-防御素-3成熟肽第29位谷氨酰胺密码子由CAG突变为精氨酸密码子CGA,其余核苷酸序列均未发生变化.将突变β-防御素-3基因在E.coli中诱导表达3～5h后可见突变β-防御素-3蛋白表达.结论 成功构建并表达了β-防御素-3突变体基因,为进一步对突变体进行真核表达、生物活性研究奠定了基础.