海洋病原细菌的氯霉素耐药菌株筛选鉴定及质粒消除

摘要

目的从污染海域筛选非临床氯霉素耐药株,研究耐药基因定位及耐药机制多样性.方法TCBS和EMB选择平板筛选,结合16S rDNA序列分析鉴定耐药株.MIC测定、基因组DNA-RAPD分型和质粒消除评估多样性.结果评估187株氯霉素耐药株的MIC值分布、属种分布、耐药基因定位及耐药机制.发现80株耐药MIC 25～128μg/ml是CLSI/NCCLS(1995年)定义临床标准(MIC 12.5μg/ml)的2～10倍,分布在弧菌科和肠杆菌科主要属种;58株MIC＞25μg/ml基因组DNA-RAPD分型与菌落表型分组结果吻合,显示多样性丰富.采用多轮高温(～43℃)和高浓度(～1%)SDS双重处理和交替培养,77株MIC＞25μg/ml分离株的质粒消除效率为28.6%;55株不能消除耐药表型,暗示染色体编码耐药基因;22株可消除氯霉素耐药表型,其中16株完全消除,暗示质粒独立编码耐药基因,6株部分消除,暗示质粒和染色体分别编码耐药基因.结论来自污染海域环境的非临床氯霉素耐药株可作为新模型,提供耐药基因定位及耐药机制多样性的新视野.