产红霉素C的糖多孢红霉菌A226G-突变体的构建

摘要

糖多孢红霉菌eryG基因编码产物为红霉素3"-O-甲基转移酶(EryG),失活eryG基因能阻断红霉素A的生物合成,积累其中间产物红霉素C.以糖多孢红霉菌A226基因组DNA为模版,用重叠PCR方法扩增出eryG基因两侧约1600bp DNA片段(△G),其中去除了EryG上S-腺苷甲硫氨酸结合区域对应的290bp DNA片段.将该片段克隆于质粒pWHM3,构建了同源重组质粒pWHMAG.PEG介导原生质体转化法将pWHM△G转入糖多孢红霉菌A226中,通过染色体同源重组突变染色体上eryG基因,利用薄层层析、PCR和质谱方法筛选出一株eryG基因突变的糖多孢红霉菌A226G-突变体,此突变体主要积累中间产物红霉素C而不再合成红霉素A.通过eryG基因的功能补偿,糖多孢红霉菌基因工程菌A226G-G+可以恢复红霉素A的合成能力.