沉默信息调节因子过表达或谷氨酰胺剥夺对肾透明细胞癌细胞凋亡、增殖的影响

摘要

背景与目的:肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)是最常见的肾癌类型,它与代谢密切相关.探讨沉默信息调节因子4(silent information regulator 4,SIRT4)过表达或谷氨酰胺(glutamine,Gln)剥夺对ccRCC细胞增殖、凋亡的影响.方法:慢病毒构建SIRT4和突变体H161Y过表达的Caki-2细胞株,利用无Gln的培养基来构建Gln剥夺模型,并通过体外增殖活力实验[细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)]和克隆形成实验来分析两者对Caki-2细胞增殖和生长能力的影响;利用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平进而评估Gln代谢对细胞ROS含量的影响;进一步通过线粒体膜电位检测、凋亡检测和蛋白质印迹法(Western blot)检测凋亡相关分子,分析SIRT4过表达以及Gln剥夺对Caki-2细胞凋亡的影响.结果:过表达SIRT4可抑制Gln代谢从而抑制Caki-2细胞增殖,另外还原性物质还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide phostate,NADPH)的生成减少能够增加细胞内ROS含量,促进细胞凋亡.而Gln剥夺抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的效果均比过表达SIRT4明显,但长期缺乏Gln将导致细胞无法生长.结论:无论是过表达SIRT4还是Gln剥夺均能抑制ccRCC细胞增殖,促进凋亡.