DDX46调控食管鳞癌TE-11细胞恶性生物学行为的机制探讨

摘要

背景与目的:DDX46是一种三磷酸腺苷依赖的RNA解旋酶,在mRNA前体剪接和核糖体组装中发挥核心作用,其在人类肿瘤中的表达及与肿瘤的相关性少见报道.该研究旨在探讨DDX46与食管鳞癌细胞恶性生物学行为之间的关系及可能的调控机制.方法:构建慢病毒载体和shDDX46质粒,转染食管鳞癌TE-11细胞,建立沉默DDX46表达的稳转细胞株,采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)鉴定转染效果;采用细胞计数和克隆形成实验检测细胞增殖能力;采用Annexin V-APC单染法流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用Western blot检测PI3K-Akt-mTOR信号通路相关分子及自噬相关蛋白的表达水平.结果:慢病毒介导的RNAi有效抑制DDX46在TE-11细胞中的表达(P<0.001).与对照组相比,靶向沉默DDX46基因后细胞计数显示,TE-11细胞生长被显著抑制(P<0.01);克隆形成实验显示,细胞克隆形成能力被显著抑制(P<0.01);流式细胞术凋亡检测显示,细胞凋亡率显著增加(P<0.01);Western blot检测发现,PIK3CG、Akt、P-Akt和mTOR表达水平显著下降(P<0.01),PTEN表达水平无显著变化(P＞0.05),而Beclin 1和LC3表达显著上调(P<0.01).结论:DDX46与食管鳞癌细胞增殖和凋亡相关;沉默DDX46可能通过PI3K-Akt-mTOR信号转导通路,同时激活了细胞凋亡和自噬,进而影响食管鳞癌细胞生长增殖.