二烯丙基二硫诱导人鼻咽癌CNE2细胞凋亡及其可能的分子机制

摘要

背景与目的:二烯丙基二硫(DADS)是大蒜中的一种脂溶性单体化合物,对多种肿瘤细胞有促凋亡作用.本实验旨在探讨DADS抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖与诱导凋亡的生物学效应及可能的分子机制.方法:分别采用MTT、光学显微镜、流式细胞仪、DNA琼脂糖凝胶电泳与Western blot检测DADS抑制CNE2细胞增殖与诱导凋亡作用及Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase 3)蛋白的表达.结果:MTT结果显示,50、100、200及400 μmol/L DADS作用CNE2细胞48 h,抑制率分别为3.66%、14.25%、29.66%及61.28%,呈浓度依赖性(P＜0.05).形态学观察发现,DADS处理24 h后,部分CNE2细胞变圆,体积明显缩小,胞质强嗜酸性,核固缩、深染,核染色质积聚至核膜周边,呈现凋亡细胞形态学改变.流式细胞术分析显示,50、100、200和400 μmol/L DADS作用24 h,凋亡率分别为(10.8±1.3)%、(14.8±1.1)%、(21.7±2.0)%及(29.8±2.6)%,呈浓度依赖性诱导CNE2细胞凋亡(n=3,P＜0.05).200及400 μmol/L DADS分别作用CNE2细胞24 h后,DNA凝胶电泳出现典型梯形条带.Western blot检测显示,50、100、200和400 μmol/L DADS处理CNE2细胞24 h后,Bcl-2蛋白与β-Actin的灰度值比分别是1.92±0.21、1.21±0.18、0.89±0.14及0.41±0.09,与对照组(2.24±0.26)比较,差异有显著性(P＜0.05);Bax蛋白与β-Actin的灰度值比分别是0.78±0.14、1.12±0.19、1.54±0.22及2.08±0.27,与对照组(0.33±0.08)比较,差异有显著性(P＜0.05);随浓度的增加,Bcl-2蛋白下调,Bax蛋白表达上调.200、400 μmol/L DADS处理CNE2细胞24 h后,与对照组相比,Caspase 3酶原蛋白条带变细并且可见到蛋白裂解产物,表明DADS可以促进Caspase 3的活化.结论:DADS具有抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖和诱导凋亡的作用,其机制可能与Bcl-2蛋白下调,Bax蛋白表达上调导致Bcl-2/Bax比值下降,促进Caspase 3的活化有关.