重组hIFN-β腺病毒对食管癌细胞增殖及细胞周期的影响

摘要

背景与目的:Ⅰ型干扰素包括IFN-α和IFN-β,是多功能的细胞因子,具有抗病毒,抗增殖,抗血管生成及免疫调节作用.许多研究已经证明,IFN-β能明显抑制多种肿瘤的生长.然而,IFN-β蛋白极短的半衰期是临床应用中面临的主要问题.此外,临床实验表明最大剂量给药后机体IFN-β血清浓度远远低于抗肿瘤效应所需要的有效药物浓度.由载体介导的基因治疗解决了这一难题.许多研究已经表明,腺病毒载体介导的IFN-β基因能在肿瘤组织局部高效表达,抑制这些肿瘤细胞和组织的生长,并能诱导其凋亡.所以,基因治疗是一种具有应用前景的治疗手段,本实验用重组腺病毒载体转染食管癌细胞,观察腺病毒(Ad)介导的hIFN-β基因对人食管癌细胞体外增殖及细胞周期的影响.方法:重组腺病毒AdhIFN-β转染食管癌细胞系KYSE150,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从RNA水平检测hIFN-β基因在KYSE150细胞中的表达,细胞生长抑制实验、集落形成能力实验检测hIFN-β基因对KYSE150细胞的体外增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞周期改变.结果:重组腺病毒经HEK293细胞扩增、纯化后滴度可达2×1011 pfu/ml,且30 MOI(multiplicity of infection)的病毒可使95%以上的KYSE150细胞感染;RT-PCR检测到外源性hIFN-β基因在KYSE150细胞中的表达;MTT实验和集落形成能力实验表明,与对照组相比,AdhIFN-β转染后细胞生长受到明显抑制;流式细胞仪检测显示细胞阻滞于S期.结论:腺病毒介导的hIFN-β基因能抑制食管癌细胞的增殖及诱导S期阻滞,为该基因应用于食管癌的治疗提供了理论基础.