siRNA干扰Chk1抑制人胃癌BGC823细胞增殖的实验研究

摘要

背景与目的:细胞周期检测点激酶1(checkpoint kinase 1,Chk1)与肿瘤的关系及其在肿瘤发生、发展及治疗中的作用是目前研究的热点.为探索Chk1在人类肿瘤细胞中对生长增殖活性和细胞周期的调控作用,本研究旨在观察SiRNA干扰Chk1基因对人胃癌BGC823细胞生长及周期的影响.方法:采用RNAi技术抑制BGC823细胞中Chk1表达,采用Western blot检测转染前后Chk1蛋白表达情况,实验分为未转染组、脂质体组和Chk1 siRNA转染组三组.然后采用MTT法和流式细胞术分析Chk1基因沉默对人胃癌BGC823细胞生长及周期的影响.结果:Western blot检测结果显示,Chk1 siRNA转染24 h后,BGC823细胞中Chk1蛋白相对灰度值为0.11±0.08,明显弱于未转染对照组的0.66±0.21和脂质体转染组的0.70±0.25(P＜0.05),而未转染对照组和脂质体转染组之间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).转染Chk1 siRNA的BGC823细胞其Chk1蛋白表达量下降了83.1%.MTT法检测结果显示,Chk1蛋白表达缺失可导致BGC823细胞增殖活性下降,其增殖抑制率为48.1%(P＜0.05).FCM法检测结果显示,Chk1基因沉默后细胞周期在G0/G1期发生停滞,未转染组24和48 h后细胞在G0/G1期为48.3%和50.2%,转染Chk1 siRNA组细胞在转染24和48 h后G0/G1期增加至63.9%和66.1%,增殖指数(PI)由51.7%(24 h)和49.8%(48 h)减少至36.2%(24 h)和34.4%(48 h).结论:Chk1 siRNA转染可明显抑制人胃癌细胞增殖,且其抑制增殖作用与诱导G0/G1期阻滞有关.