聚合酶链反应检测杜克雷嗜血杆菌实验研究

摘要

目的:近年来,国内不断有软下疳病例报告,但无1例有可靠的实验室依据.因此,探讨聚合酶链反应(PCR)检测杜克雷嗜血杆菌(H.ducreyi)的方法将其应用于临床实践,是目前我国性病防治工作的迫切要求.方法:根据杜克雷嗜血杆菌的特异性16srRNA基因序列设计上下游引物对两株参考菌株进行PCR扩增,其扩增产物以1.5%琼脂糖凝胶电泳进行检测,并测序证实.并用其它的同源或相关病原微生物进行PCR扩增,证实其特异性.再以不同浓度菌悬液扩增检测其敏感性.结果:所试两株不同来源的杜克雷嗜血杆菌的扩增呈现单一扩增区带,电泳片段位置与预期结果438bp相符,测序结果与基因库序列一致,并用具有同源及相关的微生物共19种在相同条件下同时扩增,除杜克雷嗜血杆菌外,均未扩增出预期片断,测试的最高敏感度可达10-6 ng/μl.结论:应用PCR技术检测杜克雷嗜血杆菌具有迅速、特异、敏感、简便的特点,在严格控制实验条件的情况下,PCR具有很大的实用价值,是诊断杜克雷嗜血杆菌感染的实验诊断方法.