全反式维甲酸调控miRNA-34a-E2F1-Eag1信号通路抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭的体外研究

摘要

目的探讨全反式维甲酸（ATRA）对骨肉瘤143B细胞增殖和侵袭的影响及其可能的调控机制。方法采用不同浓度ATRA处理人骨肉瘤143B细胞,选取影响细胞增殖的最佳浓度和处理时间。分别采用MTS法、Transwell迁移和侵袭实验检测ATRA处理后143B细胞增殖、迁移和侵袭能力变化。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白质印迹法检测ATRA处理后骨肉瘤143B细胞中miRNA-34a（miR-34a）、E2F1和Eag1的表达变化。干扰miR-34a和过表达E2F1,检测143B细胞增殖、侵袭和迁移能力以及miR-34a、E2F1和Eag1表达的变化。结果 ATRA浓度为10 μmol/L、处理72 h对143B细胞增殖的抑制作用最明显。10 μmol/L ATRA作用72 h的迁移细胞数、侵袭细胞数均低于阴性对照组[（73±3）个比（182±5）个,t=21.46,P＆0.01;（94±3）个比（203±7）个,t=13.70,P＆0.01]。10 μmol/L ATRA可促进143B细胞中miR-34a的表达,抑制Eag1和E2F1的表达（均P＆0.01）。与ATRA组比较,处理72 h后ATRA+miR-34a干扰组可恢复细胞的增殖能力[细胞存活率（41.0±2.2）%比（25.0±3.6）%,t=108.68,P＆0.01]。与ATRA组比较,ATRA+miR-34a干扰组可恢复细胞的迁移和侵袭能力[（122±14）个比（64±10）个,t=21.06,P＆0.01;（103±10）个比（59±8）个,t=24.27,P＆0.01],并可促进细胞中Eag1和E2F1的mRNA和蛋白表达（均P＆0.01）。与ATRA组相比,ATRA+E2F1过表达组可恢复细胞的增殖能力[细胞存活率（40.0±3.4）%比（24.0±3.1）%,t=108.74,P＆0.01],可恢复细胞迁移和侵袭能力[（78±12）个比（29±8）个,t=13.52,P＆0.01;（75±12）个比（49±10）个,t=6.28,P＆0.01)],并促进细胞中Eag1和E2F1的mRNA和蛋白表达（均P＆0.01）。结论 ATRA通过调控miRNA-34a-E2F1-Eag1信号通路抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭,其可能成为骨肉瘤有效的治疗药物之一。