里氏木霉β-木糖苷酶的分离纯化、酶学性质及水解机理研究

摘要

通过硫酸铵沉淀、超滤脱盐、离子交换层析、凝胶过滤层析等手段,从里氏木霉(Trichoderna reesei)Rut C-30木聚糖酶粗酶液中分离纯化得到分子质量110.8 ku、比活力为61.99 IU/mg的电泳纯β-木糖苷酶.酶学性质研究结果表明:该酶反应以温度60℃、pH值3.5为宜,在60℃以下、pH值3.0 ～8.0酶活性稳定,且该酶作用于对硝基苯基-β-D-木糖苷的Km值和Vmax值分别为0.29 μmol/mL和169.99 IU/mg.酶水解机理研究结果表明,该酶从低聚木糖的非还原性末端切断β-1,4-糖苷键释放出木糖,其最适作用底物是短链的低聚木糖,随着低聚木糖碳链的增长,酶作用效率逐渐下降,而对木聚糖几乎不降解.