紫草素通过激活自噬相关的E1连接酶7信号通路诱导结肠癌细胞自噬

摘要

目的 研究紫草素对人结肠癌细胞系SNU-407增殖和自噬的影响,及其潜在的分子机制.方法 通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞存活率,用Hoechst 33258染色法和流式细胞术分析细胞生长情况,采用蛋白质印迹法(Western Blot)分析不同紫草素浓度(0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L和30μmol/L)处理前后自噬相关的E1连接酶7(ATG7)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和死亡受体(Caspase-8,Caspase-3,PARP)蛋白表达情况.结果 紫草素以时间和剂量依赖性方式诱导SNU-407细胞凋亡和自噬,在紫草素处理的SNU-407细胞中观察到ATG7表达水平显著升高;与0μmol/L的紫草素相比,10μmol/L、20μmol/L和30μmol/L紫草素处理后SNU-407细胞的ATG7/自噬相关的E1连接酶5(ATG5)相对表达量分别显著增加[(176±9)％、(212±13)％和(293±11)％].与GFPi(阴性对照质粒pSUPER_GFP siRNA)阴性对照组相比,ATG被沉默的shATG7(ATG7的RNA干扰质粒pSUPER_ATG7 siRNA)组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著低于GFPi阴性对照组[(8.25±1.36)比(97.45±1.98),P<0.001],ATG7沉默后抑制了紫草素诱导的SNU-407细胞自噬;荧光显微镜结果和流式细胞术分析证实紫草素诱导结肠癌细胞凋亡;蛋白质印迹法印迹分析显示紫草素通过MAPK活化诱导结肠癌细胞凋亡,激活死亡受体(FADD)调节细胞凋亡蛋白(Caspase-8,Caspase-3,PARP)表达.此外,紫草素通过增加ATG7的表达水平,进而下调促进细胞自噬的p62表达.结论 紫草素通过激活ATG7信号通路诱导人结肠癌细胞系SNU-407细胞凋亡和自噬.