受体相互作用蛋白激酶-3参与甲型流感病毒H1N1感染C57BL/6小鼠诱导特异性CD8+T细胞应答

摘要

cqvip:目的研究受体相互作用蛋白激酶-3(receptor-interacting protein 3, RIP3)在C57BL/6小鼠感染甲型流感病毒H1N1 PR8后,在特异性CD8+T细胞免疫应答中的作用。方法用剂量为0.7×10^3半数组织细胞感染剂量(50% tissue culture infective dose, TCID 50 )的甲型流感H1N1 PR8病毒株,通过滴鼻方式分别感染RIP3敲除(RIP3 -/-)和野生型(WT)的C57BL/6小鼠。在感染后第8天(day post infection, d.p.i)分离小鼠脾细胞,使用流式细胞术(fluorescence-activated cell sorting, FACS)检测流感抗原特异性CD8+T细胞数量及功能:MHC I表位肽四聚体法(tetramer staining)染色流感特异性CD8+T细胞,细胞内细胞因子染色法(intracellular cytokine staining, ICS)检测CD8 +T细胞产生IFN-γ、TNF-α、IL-2等效应性细胞因子水平和与CD8+T细胞杀伤功能有关的颗粒酶(granzyme B)的表达情况。结果 0.7×10^3 TCID 50 流感病毒感染后,WT小鼠中流感抗原特异性CD8 +T细胞比例为RIP3 -/-小鼠的2.71倍;WT小鼠中CD8+T细胞分泌细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-2的能力均显著高于RIP3 -/-小鼠( P<0.01);且WT小鼠CD8+T表达granzyme B水平显著高于RIP3 -/-小鼠( P<0.01)。结论本研究在甲型流感病毒感染的小鼠体内发现敲除RIP3分子可导致流感感染诱导的特异性CD8+T细胞数量减少、功能降低,表明RIP3是参与流感抗原特异性CD8 +T细胞的诱生及功能发挥的关键分子之一。