宽体金线蛭提取物对HEK293细胞维甲酸诱导基因蛋白样受体（RLRs）通路的影响

摘要

维甲酸诱导基因蛋白样受体（RLRs）信号通路是机体重要的抗病毒作用途径。宽体金线蛭体内含有抗凝血的活性物质，主要用于治疗血栓等疾病，但对于该信号通路的影响尚无任何报道。本试验目的是采用聚肌苷酸-聚胞苷酸（Poly I∶C）建立HEK293细胞RLRs信号通路激活模型，在此基础上揭示宽体金线蛭提取物（LE）对HEK293细胞RLRs信号通路的影响。试验首先转染3个不同质量浓度(1、2、4μg·mL-1)的Poly I∶C至HEK293细胞，并分别处理12 h、24 h和48 h,以维甲酸诱导基因I（RIG-I）的蛋白表达水平和mRNA转录水平为RLRs通路激活的指标。RLRs信号通路激活之后，采用LE对HEK293细胞进行处理，共设置4组，每组3个重复，分别为：对照组、2μg·mL-1 Poly I∶C转染组、2μg·mL-1 Poly I∶C转染且添加150μg·mL-1的水蛭提取物、2μg·mL-1 Poly I∶C转染且添加300μg·mL-1的水蛭提取物。处理时长分别为24 h和48 h。试验结果表明，转染3个剂量的Poly I∶C在3个处理时长均引起细胞活力降低，2μg·mL-1和4μg·mL-1 Poly I∶C转染HEK293细胞12 h、24 h和48 h均显著提高了RIG-I蛋白的表达量，4μg·mL-1的Poly I∶C转染组RIG-I mRNA转录水平在24 h和48 h显著提高。选择Poly I∶C质量浓度2μg·mL-1,处理24 h和48 h作为后续试验激活RLRs的处理条件。质量浓度为150μg·mL-1 LE可以显著抑制Poly I∶C介导的细胞活力降低；300μg·mL-1的LE显著降低了RIG-I的蛋白水平；150μg·mL-1和300μg·mL-1 LE处理24 h和48 h后均显著抑制了β干扰素的mRNA转录和生成。据此得出如下结论：Poly I∶C转染HEK293细胞成功地激活了RLRs信号通路，宽体金线蛭提取物具有促进HEK293细胞活力和抑制β干扰素生成的作用。