SB2023580对全身照射小鼠造血组织辐射损伤保护作用的观察及分子机制的研究

摘要

骨髓造血组织功能抑制是肿瘤放疗与化疗的常见的副作用,也是高剂量核辐射事故的首要死亡原因,临床上表现为急性和慢性骨髓抑制。急性骨髓抑制即刻出现严重的症状,导致辐射事故受害者与放疗患者的死亡,或者使肿瘤放疗病人的病情恶化。慢性骨髓抑制起病隐匿,病情迁延并且难以康复,而且,由于临床对急性骨髓抑制的治疗掩盖这种难以逆转的骨髓损伤。由于骨髓功能抑制难以治愈,急需对其发病机制进行研究,为骨髓功能抑制的有效治疗与预防提供依据。众多证据表明造血细胞凋亡引发急性骨髓抑制,而造血干细胞的衰老被认为是骨髓长期抑制的主要原因,多项研究表明电离辐射激活p38 MAPK诱导造血细胞凋亡和衰老。
　　 本研究以p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580为研究对象,研究其对全身照射小鼠造血细胞的辐射保护作用,并初步探讨其作用的机制。包括三部分实验:1)SB203580对造血祖细胞和造血干细胞保护作用的观察:小鼠随机分为对照组、照射组及SB203580给药组,以6.0 Gy137Csγ射线全身均匀照射SB203580给药组和照射组的C57BL/6小鼠。收集并计数外周血红细胞、白细胞和血小板,以及单侧股骨骨髓有核细胞；骨髓细胞半固体培养法检测骨髓有核细胞增殖能力,卵石样造血集落形成实验检测造血干细胞增殖能力。2)SB203580的抗氧化作用:收集小鼠骨髓有核细胞,分组同上,照射组与SB203580给药组细胞进行1Gy体外照射,照射之后孵育过夜,酶标仪检测细胞内活性氧水平。3)SB203580对造血干细胞样细胞p16 mRNA表达的影响:磁珠分离小鼠系标记阴性骨髓造血细胞,分为对照组、照射组、照射+放线菌素D组、照射+SB203580组、照射+SP600125组,细胞照射剂量为4Gy。培养后去除悬浮细胞,消化贴壁细胞后重新贴壁取非贴壁细胞为干细胞样细胞,提取RNA,Real-time PCR检测p16与p21 mRNA的表达情况。
　　 本研究观察到SB203580给药组外周血白细胞、血小板的数量分别比照射组高111.8％和157.7％(P<0.05)； SB203580给药组骨髓有核细胞较照射组组高135.4％,CFU—GM升高188.5％(P<0.05),CAFC阳性细胞形成率较照射组高146.6％(P<0.01)。SB203580处理组体外受照骨髓有核细胞内活性氧较照射组低56.2％(P<0.05)；放线菌素D可部分抑制p16mRNA表达,SB203580处理可完全抑制p16 mRNA升高。
　　 综上所述,SB203580对照射造成的小鼠造血组织损伤具有一定的保护作用,这种保护作用可能与SB203580降低照射后骨髓有核细胞内活性氧水平和种造血干细胞样细胞内p16 mRNA表达有关。