基于UPLC--ESI--QTof的山豆根、苦参化学成分比较及柴胡不同提取方法柴胡皂苷a、d变化的研究

摘要

山豆根为豆科槐属植物越南槐Sophora tonkinensis Gapnep.的干燥根及根茎，具有清热解毒、消肿利咽的功效;苦参为同属植物苦参Sophoraflavescens Ait.的干燥根，具有清热燥湿、杀虫利尿的功效。传统的化学分离方法研究表明，二者具有相似的化学成分，目前很难从物质基础解释二者临床应用的差异。本文首先应用UPLC-PDA筛选出山豆根和苦参的代表性药材，然后应用高灵敏度的UPLC-ESI-QTof方法，对山豆根和苦参的化学成分进行了详细的分析。 采用AcquityUPLC BEH C18(2.1 mm×150 mm，1.7μm)色谱柱，乙腈-5mmol/L甲酸铵水溶液为流动相，飞行时间质谱为检测器，正离子扫描模式，建立了山豆根和苦参生物碱部分的UPLC-ESI-QTof的分析方法。分析结果表明山豆根和苦参生物碱部分成分组成相似，主要含有5α，9α-二羟基苦参碱，氧化苦参碱，氧化槐果碱，苦参碱等。引起生物碱差异的生物碱有苦参碱，氧化槐醇，槐醇的羟基取代物，氧化苦参碱（苦参），氧化槐果碱，槐定碱，N-甲基金雀花碱，槐果碱（山豆根）。主要差别是不同化合物的含量不同。 采用Acquity UPLC BEH C18（2.1 mm×150 mm，1.7μm）色谱柱，乙腈-0.01％甲酸水溶液为流动相，飞行时间质谱为检测器，负离子扫描模式，建立山豆根和苦参非生物碱部分的U-PLC-ESI-QTof的分析方法。分析结果表明苦参非生物碱部分的苦参黄酮为主成分。特征性成分有kushenol E、kurarinone、 kushenolⅠ、isokurarinone等。山豆根非生物碱部分皂苷，山豆根黄酮为主成分。特征性成分有sophoradinⅠ、sophoranochromeneⅦ、subprosideⅡ、isoanhydroicarition等。山豆根和苦参非生物碱部分成分差距较大，有明显差异。 为了进一步鉴定山豆根与苦参非生物碱部分成分的差异，我们对山豆根非生物碱部分进行了分离，通过多种分离方法分离得到了13个单体化合物（S1-S13），利用现代波谱学技术（包括UV、1HNMR、13CNMR、ESI-MS等）鉴定了他们的结构。包括5个黄酮类化合物:3，4'-羟基，7-甲氧基黄酮(3，4'-dihydroxy-7-methoxy-flavonesS6)，7,4'-二羟基黄酮（7，4'-dihydroxy flavones S7），槲皮素（Quercetin S8），高丽槐素(maaekiain S13)，异槲皮苷(isoquercitrin S11)，4个甾醇及甾醇苷类成分:β-谷甾醇(β-sitosterol S3)，豆甾醇(stigmasterol S5)，胡萝卜苷(daucosterol S9)，豆甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷（stigmasterol-3-O-β-D-glucopyranoside S10），一个三萜类成分:羽扇豆醇（lupeol S4），一个长链脂肪酸酯:亚油酸乙酯(ethyl linolkeate S1)，两个芳基脂肪酸酯:3-（3-羟基-4-甲氧基苯基）-2-丙烯酸二十二酯(3-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)-2-propenoic acid docosyl ester S2），2-对羟基苄基酒石酸-4-乙酯(2，3-dihydroxy-2-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-butanedioic acid-4-ethyl esterS12)，其中S1，S2，S12为首次从该植物得到。 以上研究结果表明:山豆根和苦参的生物碱类成分相似，而非生物碱类成分差异较大。非生物碱成分可能是引起二者临床疗效差异的主要物质基础。 此外，本文使用UPLC-ESI-QTof研究了不同提取条件下柴胡皂苷a、d的转化规律。色谱柱为Acquity UPLC BEH C18（2.1mm×50mm，1.7μm）;流动相为乙腈-0.01％甲酸水溶液;流速为0.45mL/min。以四极杆串联飞行时间质谱(Q-Tof)为检测器，使用负离子检测模式，对经过12种不同提取方法提取的柴胡样品(1～12)进行检测。得到柴胡皂苷a、d不同提取方法下的转化规律:酸性常温条件下水解生成柴胡皂苷b1、b2，酸性加热情况下糖苷键水解生成皂苷元;中性，碱性条件下均较稳定。该研究结果对柴胡药材及含柴胡中成药的质量控制提供了参考依据。

目录

声明

摘要

前言

第一章 综述

第一节 液相色谱-质谱联用技术在天然药物研究中的应用进展

1．LC-MS仪器简介

2．LC-MS联用技术在植物药研究中的应用

3．展望

参考文献

第二节 山豆根和苦参化学成分及生物活性研究进展

1．化学成分

2．活性研究

参考文献

第二章 基于UPLC-ESI-QTof的山豆根和苦参化学成分比较研究

第一节 UPLC-ESI-QTof分析样品的选择

1．材料与方法

2．样品分析

3．结果与讨论

第二节 山豆根和苦参生物碱类成分UPLC-ESI-QTof比较研究

1．材料与方法

2．实验结果

3．小结与讨论

第三节 山豆根和苦参非生物碱类成分UPLC-ESI-QTof比较研究

1．材料与方法

2．实验结果

3．小结与讨论

参考文献

第三章 山豆根非生物碱类成分的分离和结构鉴定

1．材料和方法

2．提取与分离

3．化合物结构鉴定结果

4．化合物结构鉴定数据

5．小结与讨论

参考文献

第四章 基于UPLC-ESI-QTof的柴胡不同提取方法柴胡皂苷a，d的变化规律研究

1．材料与方法

2．结果

3．结论与讨论

4．展望

参考文献

总结

致谢

作者简介

附图