第一部分：基于全外显子组测序探索乳腺癌腋窝淋巴结转移相关基因的研究；第二部分：乳腺导管内乳头状肿瘤临床病理及预后分析

摘要

本文主要从以下几个部分展开论述:
　　第一部分 基于全外显子测序探索乳腺癌腋窝淋巴结转移相关基因的研究
　　背景:乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤。淋巴结转移是乳腺癌最主要的转移途径，腋窝淋巴结转移是影响乳腺癌预后的重要因素。影响乳腺癌腋窝淋巴结转移的因素较多，但转移机制仍处在探索阶段。
　　方法:本研究纳入10例术前超声、术中触诊、术后病理检查证实存在多枚腋窝淋巴结转移乳腺癌患者，留取外周血、肿瘤原发灶、腋窝淋巴结转移灶标本进行全外显子组测序，获得与乳腺癌腋窝淋巴结转移相关突变位点。通过生物信息学方法筛选并同已知数据库对比分析，获得可能与转移相关位点。免疫组织化学染色方法评估相关基因编码蛋白在肿瘤细胞、转移淋巴结中表达情况。
　　结果:应用全外显子组测序方法对10例患者原发肿瘤、外周血、转移淋巴结进行测序，平均测序深度123×，20以上覆盖率达到90％以上。原发灶平均SNV数为5066，转移灶平均SNV数目为5141。原发灶平均Indel数为1400，转移灶平均Indel数为1476。经筛选及与已知数据库对比分析后，9个基因被筛选为原发性肿瘤中的显著特异性突变，15个基因为转移性淋巴结中的显着特异性突变。应用MutSigCV筛选发现HRNR、AHNAK2基因是淋巴结转移特异性基因，可能与乳腺癌腋窝淋巴结转移相关。对HRNR和AHNAK2编码的蛋白进行石蜡组织切片免疫组化染色，应用Image Pro-Plus6.0软件计算不同部切片平均光密度值，研究结果提示转移淋巴结组织平均光密度值为0.0471±0.0185，高于正常淋巴结组织0.0027±0.0006，两者比较差异具有显著性(P=0.039)。
　　结论:乳腺癌原发灶及腋窝淋巴结转移灶各自存在特异性突变，其中淋巴结转移灶突变数量更多，不同生物信息学分析方法验证结果提示AHNAK2、HRNR等基因突变可能与淋巴结转移密切相关。
　　第二部分 乳腺导管内乳头状肿瘤病理特征及预后分析
　　目的:探讨乳腺导管内乳头状肿瘤的临床病理特征和癌变影响因素，分析乳腺导管内乳头状肿瘤预后，探讨诊治方法，提高对本病的认识。
　　方法:回顾性分析2010年1月至2016年1月中国医学科学院肿瘤医院收治的674例乳腺导管内乳头状肿瘤患者的临床病理资料并进行随访。
　　结果:674例患者中，乳腺导管内乳头状瘤患者547例，导管内乳头状癌患者88例，囊内乳头状癌患者32例，实性乳头状癌患者7例。中位随访46个月，547例导管内乳头状瘤患者中有13例(2.4％)原手术部位同象限出现导管内乳头状瘤局部复发，10例(1.8％)原手术部位同象限出现乳腺癌。Kaplan-Meier生存分析结果提示，导管内乳头状瘤患者和导管内乳头状瘤伴不典型增生患者的3年无复发生存率分别为97.7％和93.5％，无复发生存曲线的差异有统计学意义(P=0.009)。Cox多因素分析结果显示，不典型增生是影响乳腺导管内乳头状肿瘤无复发生存的主要因素(P=0.020)。4例(3.1％)导管内乳头状癌患者出现局部复发。Logistic分析结果显示，年龄≥45岁、临床表现为乳房肿物、肿瘤最大径≥2 cm是恶性乳腺导管内乳头状肿瘤的可能临床表现（均P＜0.05）。
　　结论:乳腺导管内乳头状肿瘤具有一定的复发率，年龄、临床特征及肿瘤大小可能是恶性导管内乳头状肿瘤的预测因素。

目录

图表索引

缩略词表

第一部分 基于全外显子测序探索乳腺癌腋窝淋巴结转移相关基因的研究

摘要

前言

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

第二部分 乳腺导管内乳头状肿瘤的临床病理特征及预后分析

摘要

前言

材料方法

结果

讨论

结论

参考文献

基金资助

文献综述 新一代测序技术在乳腺癌中的应用

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