IL-10,IL-12和IFN-a在肝癌细胞中通过激活JAK-STAT和Raf-MEK-ERK信号转导途径调节抗病毒蛋白2’,5’-OAS和PKR基因表达

摘要

目的:1.探讨阻断HepG2细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号途径对IFN-αJAK-STAT信号转导途径分子和抗病毒蛋白表达的影响。
　　2.探讨IL-10,IL-12和IFN-a在HepG2.2.15细胞中是否通过激活JAK-STAT和Raf-MEK-ERK信号转导途径调节抗病毒蛋白2'-5'寡腺苷酸合成酶(2'-5'OAS)和双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)基因表达。
　　方法:1.以人肝胚瘤细胞株HepG2细胞为研究对象,以单独IFN-α及IFN-α和ERK抑制剂PD98059联合处理HepG2细胞,分析阻断ERK途径对HepG2细胞IFN-α应答的变化。
　　2.以STAT1抑制剂Fludarabine和ERK抑制剂PD98059分别预处理HepG2.2.15细胞,再以IL-10,IL-12和IFN-a处理细胞12h,用逆转录PCR(RT-PCR)和Westernblot分析抗病毒蛋白2’,5’-OAS和PKR基因表达。
　　结果:1.RT-PCR结果显示,HepG2细胞经IFN-α处理后,细胞内抗病毒蛋白和JAK-STAT信号传导途径分子STATl、STAT2、IRF9mRNA表达均增高,其中IFN-α和PD98059联合处理组表达升高更为明显。Westernblot分析STAT1,STAT2结果与RT-PCR结果相一致,即IFN-α处理组表达升高,IFN-α和PD98059联合处理组升高更加显著。此外,HepG2细胞经IFN-α处理后JAK-STAT信号传导途径抑制因子3(SOCS3)的表达升高明显;IFN-α和PD98059联合处理后,SOCS3的表达显著下降。
　　2.在HepG2.2.15细胞中,IL-10,IL-12和IFN-a均可以激活JAK-STAT和ERK途径。RT-PCR结果显示HepG2.2.15细胞经IFN-a处理后上调2’,5’-OAS和PKRmRNA的表达。然而,IL-10和IL-12在处理HepG2.2.15细胞12h后2’,5’-OASmRNA分别上调2和2.5倍,但两者对PKRmRNA都无明显调节作用。在STAT1抑制剂Fludarabine预处理的组别,抗病毒蛋白2’,5’-OAS和PKRmRNA表达均下降。然而在ERK抑制剂PD98059预处理的组别,抗病毒蛋白2’,5’-OASmRNA表达均明显上升,PKRmRNA表达无明显变化。
　　结论:1.在体外细胞模型在HepG2中,ERK信号转导途径可能通过调节SOCS3蛋白的表达而参与IFN-α抗病毒效应。
　　2.在HepG2.2.15细胞中,抗病毒蛋白2’,5’-OAS和PKR的表达受到JAK-STAT和Raf-MEK-ERK信号转导通路的调节。

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第一部分阻断HepG2细胞中ERK信号转导途径对IFN诱导抗病毒蛋白的影响

1前言

2 材料和方法

3 结果

4 讨论

5 结 论

6 参考文献

第二部分IL-10,IL-12和IFN-a在HepG2.2.15细胞中通过激活JAK-STAT和Raf-MEK-ERK信号转导途径调节抗病毒蛋白2’,5’-OAS和PKR基因表达

1前言

2 材料和方法

3 结果

4 讨论

5 结 论

参考文献

附 录

致谢

综述