病毒RNA提取方法的比较研究及其唾液中猪圆环病毒荧光定量PCR检测方法的建立和初步应用

目录

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摘要

缩略语表

第一章核酸提取方法

1核酸提取方法的分类

1．1非磁性方法

1．2磁性法

2常用的核酸提取方法

2．1胍盐提取结合二氧化硅吸附法

2．2 TRIzol试剂提取RNA方法

2．3离心柱提取

2．4磁珠法

参考文献

第二章圆环病毒研究进展

1圆环病毒

1．1病毒结构

1．2 PCV病原学

1．3 PCV的基因和蛋白

2猪圆环病毒流行病学

2．1病毒变异

3传播途径

3．1易感动物

3．2传播方式

4 PCV2与免疫系统的相互作用

5猪圆环病的主要临床疾病

5．1断奶仔猪多系统衰竭综合征

5．2猪皮炎肾病综合征

5．3猪呼吸道疾病综合征

5．4相关母猪繁殖障碍疾病

6猪圆环病的诊断

6．1病毒的分离与鉴定

6．2聚合酶链式反应

6．3免疫组织化学试验

6．4酶联免疫吸附试验

6．5荧光定量PCR

6．6原位杂交

7 PCV2疫苗的研究进展

7．1灭活疫苗

7．2弱毒疫苗

7．3基因工程亚单位疫苗

7．4伪狂犬病毒活载体疫苗

8猪唾液中检测PCV

9实时荧光定量PCR技术

9．1基本原理

9．2实时荧光定量TaqMan探针技术

参考文献

第三章5种商品化试剂提取病毒RNA的比较研究

1材料与方法

1．1试剂

1．2总RNA提取

1．3 RNA质量检测

2结果

2．1 RNA浓度检测结果

2．2 Real—time PCR检测结果

3讨论

第四章唾液中猪圆环病毒荧光定量PCR检测方法的建立和初步应用

1材料

1．1主要试剂

1．2主要仪器设备

2方法

2．1唾液样本的采集

2．2口腔液预处理

2．3病毒核酸的提取

2．4设计引物探针

2．5质粒标准的制备

2．6荧光定量标准曲线的绘制

2．7荧光定量方法的敏感性实验

2．8荧光定量方法的特异性实验

2．9荧光定量方法的重复性实验

2．10临床唾液样本的检测

3结果

3．1扩增目的基因

3．2重组质粒的验证

3．3质粒浓度及拷贝数的计算

3．4标准曲线的建立

3．5特异性实验

3．6重复性实验

3．7敏感性实验

3．8临床唾液样本的检测

4讨论

参考文献

全文总结

致谢

攻读硕士期间发表的论文