葛根芩连汤对慢性牙周炎合并动脉粥样硬化大鼠模型TNF-α水平的影响

摘要

目的：通过建立牙周炎合并动脉粥样硬化大鼠模型，检测肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α）水平，应用药物治疗，检测TNF-α水平，分析葛根芩连汤对慢性牙周炎合并动脉粥样硬化模型大鼠治疗效果，为临床治疗提供实验依据。　　方法：46只健康 Wistar大鼠，雌鼠和雄鼠各23只，分笼饲养，按体重随机分为两组：正常对照 N组8只，正常饲喂，普通饮食、饮水，在剩余大鼠的左上颌第二磨牙牙颈部用0.2mm钢丝结扎，高脂饲料饲喂大鼠并配合药物诱导，用时12w建立慢性牙周炎合并动脉粥样硬化的复合型大鼠模型。12w末，将正常组和模型组大鼠分别随机处死3只，剩余模型组大鼠随机分成5组，并进行处理：空白对照（D0）组灌胃0.9％生理盐水2ml∕kg；甲硝唑（D1）组灌胃甲硝唑0.05g∕kg；阿伐他汀（D2）组灌胃阿伐他汀0.08g∕kg；联合用药（D3）组同时灌胃阿伐他汀0.08g∕kg和甲硝唑0.05g∕kg；葛根芩连汤（D4）组灌胃葛根芩连汤0.42g∕kg，所有动物灌胃体积不超过4ml∕kg，所有动物于12周末开始连续灌胃持续4w至实验结束。于实验12w末和16w末麻醉状态下分别检测各组大鼠牙周各项指标（SBI、PD、AL）、腹主动脉采血后检测血脂各项指标（TC、TG、LDL、HDL）、腹主动脉取血采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清TNF-α水平；将牙周组织、动脉血管组织制作成石蜡切片，一部分切片进行HE染色光镜下观察病理学变化病理切片上测量牙周袋深度（PD）和附着丧失（AL），一部分切片用来做免疫组织化学染色（Immunohistochemistry，IHC），观察TNF-α在牙周组织和腹主动脉中的阳性表达部位，半定量检测 TNF-α在牙周组织和腹主动脉中的表达水平。　　结果：1一般情况观察：正常组大鼠饮食活动规律。模型组大鼠饮食明显减少，被毛杂乱，体重下降，牙周组织出现炎症。2 HE染色光镜下所见：正常组大鼠牙周组织中骨组织，牙周纤维，牙周膜宽度等无明显改变；血管管壁均匀一致。模型组大鼠牙周组织中大量炎细胞浸润，上皮钉突伸长，牙槽骨不规则吸收，牙周膜宽度增加出现牙周袋；腹主动脉血管内膜增厚，血管壁出现不规则的改变，粗细不一，出现动脉斑块并有脂质沉积。各治疗组炎症减轻，腹主动脉内膜厚度减小，部分血管管壁均匀一致。图像分析软件在病理切片上精确测定牙周探诊深度及附着丧失，模型组牙周探诊深度与附着丧失水平与正常对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。3免疫组织化学检测TNF-α的表达情况：TNF-α在胞浆和（或）细胞器内呈阳性表达，表现为呈黄色或棕黄色颗粒。半定量分析 TNF-α的表达情况，即牙周组织和腹主动脉TNFα的OD值：12w时D组与N组比较明显升高差异有统计学意义（P＜0.01），16w时各治疗组与D0组比较显著降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。.4血清中TNF-α含量变化：12w时D组血清中TNF-α含量与N组比较明显升高，差异具有显著性（P＜0.01）；16w时各治疗组与 D0组比较，TNF-α表达水平明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。5实验12w末，D组血清中TC、TG、LDL水平均较 N组升高，HDL降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。16w末，各治疗组 TC、TG、LDL水平均较 D0组降低，HDL升高，差异有统计学意义（P＜0.05），D4组各项实验指标均与 D3组无明显改变，差异无统计学意义（P＞0.05）。　　结论：1 TNF-α在牙周炎合并动脉粥样硬化模型大鼠表达水平明显高于正常对照组大鼠。2选用的各组药物都有效的抑制了牙周炎合并动脉粥样硬化大鼠模型TNF-α在血清、牙周组织、血管中的表达水平。其中，联合用药组与葛根芩连汤组的效果最好。3葛根芩连汤治疗组对模型大鼠牙周和血脂等各指标有明显改善，说明该药起到了一定的疾病防治作用，提示在传统的治疗法的基础上适当的辅以该类药物，有助于增强疗效。

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引言

第1章 实验研究

1.1 材料与方法

1.1.1实验动物

1.1.2实验试剂

1.1.3实验药品、试剂的配制

1.1.4实验设备

1.1.5动物模型建立

1.1.6治疗方法

1.1.7标本制备

1.1.8HE检测

1.1.9 TNF-α的免疫组织化学染色观察及检测

1.1.10 ELISA检测

1.1.11测量方法

1.2 结果

1.2.1大体情况观察及体重变化

1.2.2牙周检查结果

1.2.3血液采集及血脂各指标的检测

1.2.4 ELISA 检测血清TNF-α结果

1.2.5牙周组织病理学观察

1.2.6动脉组织 HE 染色结果

1.2.7免疫组织化学法检测大鼠牙周组织和腹主动脉中TNF-α含量

1.3 讨论

1.3.1 TNF-α在牙周炎伴动脉粥样硬化疾病中作用致病机制的探讨

1.3.2各组大鼠用药的选择意义

1.4 小结

参考文献

第2章 综 述:TNF-α在牙周炎和动脉粥样硬化发病中作用的研究进展

2.1 TNF-α的生物学作用

2.2 TNF-α与牙周炎

2.3 TNF-α与动脉粥样硬化

2.4 TNF-α在牙周炎和动脉粥样硬化相互联系中发挥作用的探讨

参考文献

结论

致谢

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