1.GRP30调节人绒毛滋养细胞凋亡参与子痫前期发病机制；2.IL-33对人滋养细胞功能的调控与子痫前期发病机制的关系

摘要

目的：探讨人胎盘绒毛滋养细胞中不同GPR30的表达对细胞凋亡程度的影响;研究其与子痫前期发病机制的关系。　　方法：应用蛋白印记技术（western blot;WB）检测正常妊娠孕妇胎盘和子痫前期孕妇胎盘中 G 蛋白偶联受体 30 (G protein-coupled receptor 30;GPR30)蛋白和cleaved caspase3、cleaved caspase7、cleaved caspase9的表达量。以常氧和缺氧复氧（H/R）分别在正常产妇胎盘绒毛上模拟正常妊娠和子痫前期状态;WB 检测常氧和缺氧复氧条件下GPR30表达的变化;随后GPR30激动剂G1、GPR30抑制剂G15和17β -雌二醇（17β -estradiol;E2）处理绒毛外植体。WB检测各处理组中cleaved caspase3的表达量;TUNEL检测各处理组中凋亡水平。　　结果：（1）GPR30 蛋白在子痫前期组中表达较正常组显著降低;在子痫前期组中; cleaved caspase3、cleaved caspase7和cleaved caspase9的表达显著升高。（2）经H/R处理后;外植体模型中GPR30蛋白的表达量较常氧组降低。（3）在常氧和H/R组中;GPR30抑制剂G15单独处理或联合E2同时处理绒毛外植体会使其凋亡水平显著增加;GPR30激动剂G1、E2处理绒毛外植体能显著降低其凋亡水平。　　结论：人胎盘绒毛滋养细胞中不同GPR30的表达量可参与细胞凋亡水平的调节;进而破坏滋养细胞的凋亡和增殖平衡;影响滋养细胞功能;可能参与子痫前期发病机制。　　目的：探讨IL-33在人类胎盘中的表达和定位;研究IL-33对人绒毛滋养细胞迁移和侵袭的影响及其潜在机制;为子痫前期的机制研究提供新方向。　　方法：（1）应用免疫组化技术（immunohistochemistry;IHC）检测正常产妇胎盘、重度子痫前期患者胎盘、早孕绒毛和蜕膜中IL-33(interleukin-33)的表达和定位;蛋白印记技术（western blot;WB）检测正常产妇胎盘、重度子痫前期产妇胎盘中IL-33表达水平。（2）用不同浓度的亚硝基铁氰化钠（Sodium Nitroprusside;SNP）处理绒毛外植体构建子痫前期模型;WB检测模型中IL-33的表达。（3）转染慢病毒颗粒;干扰早孕绒毛外植的IL-33基因表达。（4）实时荧光定量PCR （Quantitative real-time polymerase chain reaction; qRT-PCR）及WB检测干扰效率。（5）使用绒毛外植体培养探究敲低IL-33对绒毛外滋养细胞功能的影响。（6）WB检测慢病毒干扰IL-33表达后;绒毛外植体中基质金属蛋白酶抑制物-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1;TIMP1）、基质金属蛋白酶抑制物-2（tissue inhibitor of metalloproteinase-2;TIMP2）的表达水平。　　结果：（1）IHC结果显示IL-33在正常早孕期绒毛和蜕膜组织中均有表达;在绒毛组织中主要定位于合体滋养层细胞和滋养细胞柱;在蜕膜组织中主要定位于绒毛外滋养细胞和腺上皮细胞。（2）IL-33在妊娠晚期胎盘组织有表达;且在重度子痫前期患者胎盘中的表达量较正常产妇胎盘显著降低。（3）不同浓度的SNP构建子痫前期模型中;IL-33表达量随SNP浓度的增加;先升高后持续降低。（4）慢病毒敲低IL-33;早孕绒毛外植体外生性生长侵袭距离显著缩短;绒毛外植体中 TIMP1和TIMP2表达水平明显升高。　　结论：IL-33参与人滋养细胞功能的调控;对滋养细胞的功能有促进作用;IL-33表达的紊乱可能与子痫前期发病机制有关。

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