山核桃×薄壳山核桃授粉子代AFLP、SSR分析

摘要

山核桃属(Carya Nutt.)植物是重要的木本油料作物,其果实是世界性著名干果,经济价值大,对提高山区农民收入有着重要意义。山核桃油味清香,营养丰富,薄壳山核桃坚果个大、壳薄、出仁率高、易于机械剥壳取仁,通过杂交能将山核桃和薄壳山核桃的优良性状整合到一起,得到表型、质量都优于亲本的杂交子代。研究山核桃×薄壳山核桃授粉子代分子标记,为良种选育提供新的理论基础,对山核桃改良具有重要的理论和实际意义。 本文通过套袋授粉,构建了山核桃×薄壳山核桃F1代授粉群体,并利用AFLP和SSR对其进行遗传变异分析。实验结果表明： (1)山核桃×薄壳山核桃授粉果实性状与对照间存在显著性差异,控制授粉对果实表型的影响很大,且山核桃×薄壳山核桃授粉果实在单果重、果长、果径、果形指数、壳厚、壳重、仁重上都优于自然授粉果实。 (2)改良CTAB法适宜提取山核桃×薄壳山核桃授粉子代基因组DNA,浓度和纯度均满足PCR及酶切的需要。 (3)-步法中酶切6h和酶切过夜及两步法中酶切2h对AFLP选择性扩增的影响是一样的,但二步法较繁琐,一般采用一步法酶切6h或过夜反应：酶切连接产物稀释倍数和预扩产物稀释倍数对AFLP选择性扩增的影响不大。 (4)山核桃×薄壳山核桃授粉子代的SSR最佳反应体系为1×PCR Buffer,Taq聚合酶2.0U,dNTP 0.20 mmol·L-1,引物0.13μmol·L-1,Mg2+1.5 mmol·L-1,模板DNA600ng,加ddH2O至30μl。 (5)10对AFLP引物分析试验结果表明：在同一对引物中,母本与子代、子代与子代间都无差异条带,父本和母本、子代间有差异条带。 (6)19对SSR引物分析试验结果表明：在同一对引物中,母本与子代、子代与子代间都无差异条带,4对引物父本和母本、子代间有差异条带,9对引物父本和母本、子代间没有差异条带。

目录

文摘

英文文摘

声明

1引 言

1.1 DNA分子标记的类型

1.1.1限制性片段长度多态性

1.1.2随机扩增多态性DNA

1.1.3扩增性片段长度多态性

1.1.4简单序列重复标记

1.1.5其它DNA分子标记

1.1.6几种常用分子标记的比较

1.2 DNA分子标记在林木遗传研究中的应用

1.2.1种质资源研究

1.2.2遗传多样性研究

1.2.3系谱分析和分类

1.2.4分子遗传图谱的构建

1.2.5基因标记

1.2.6分子标记辅助育种

1.3山核桃研究进展

1.3.1山核桃生态生物学特性研究

1.3.2山核桃繁育技术研究

1.3.3山核桃遗传学研究

1.4研究目的和意义

2 山核桃×薄壳山核桃授粉

2.1材料与方法

2.1.1授粉亲本的选择

2.1.2套袋授粉

2.1.3授粉果实表型测定

2.1.4授粉果实品质测定

2.2结果与分析

2.2.1山核桃授粉座果情况观察

2.2.2授粉果实表型和品质分析

3 山核桃×薄壳山核桃授粉子代AFLP分析

3.1材料与方法

3.1.1实验材料

3.1.2实验试剂

3.1.3基因组DNA的提取及检测

3.1.4四种DNA提取方法对AFLP体系的影响

3.1.5 AFLP反应体系的优化

3.1.6 AFLP引物筛选

3.1.7 AFLP分析试验

3.2结果与分析

3.2.1四种DNA提取方法纯度检测结果

3.2.2不同DNA提取方法对AFLP体系的影响

3.2.3 AFLP反应体系的优化

3.2.4 AFLP引物筛选结果

3.2.5 AFLP分析试验结果

4 山核桃×薄壳山核桃授粉子代SSR分析

4.1材料与方法

4.1.1实验材料

4.1.2实验试剂

4.1.3基因组DNA的提取及检测

4.1.4 SSR反应体系的优化

4.1.5 SSR分析试验

4.2结果与分析

4.2.1 SSR反应体系的优化

4.2.2 SSR分析试验结果

5讨 论

5.1山核桃×薄壳山核桃授粉

5.2山核桃×薄壳山核桃授粉子代基因组DNA的提取

5.3山核桃×薄壳山核桃授粉子代AFLP和SSR分析

参考文献

个人简历及学术论文

致 谢