引言
实验材料
实验方法
1 细胞培养
1.1实验相关溶液配制
1.2 细胞复苏
1.3 细胞传代
1.4 细胞冻存
1.5 细胞计数
2 构建ShPTP1B1慢病毒载体
2.1设计和合成PTP1B特异性shRNA序列
2.2用Agel和Mlμl双酶切pSuoer-GFP载体，酶切体系为
2.3目的DNA片段的回收
2.4连接 体系如下
2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备
2.6质粒DNA的转化
2.7 提质粒
2.8 制备病毒感染胶质瘤细胞
3 MTT实验检测PTP1B敲除后对U87细胞增殖的影响
4 克隆形成实验检测PTP1B敲除后对单个细胞增殖的影响
5 细胞划痕实验检测PTP1B对细胞迁移的影响
6 Transwell 小室实验检测PTP1B对人神经胶质瘤U87 细胞侵袭的影响
7 流式细胞仪检测 PTP1B对人神经胶质瘤 U87 细胞周期的影响
8 Western-blot 检测PTP1B对人神经胶质瘤 U87 细胞相关蛋白的影响
8.1 试剂配制
8.2 蛋白的提取
8.3蛋白定量测定
8.4 SDS-PAGE电泳
8.5 电转移
8.6 免疫印迹显色：ECL显色系统
8.7结果分析
9 统计学分析
结果
1 PTP1B基因干扰效率
2 MTT法检测PTP1B敲低后对U87 细胞增殖能力的影响
3 流式细胞仪和western blot检测 PTP1B对人神经胶质瘤 U87 细胞周期影响
4 Transwell小室实验和细胞划痕实验检测PTP1B对胶质瘤细胞侵袭及迁移能力的影响
5 PTP1B影响胶质瘤细胞生长和迁移的分子机制
讨论
结论
参考文献
综述:蛋白酪氨酸磷酸酶1B在肿瘤中的两面性作用研究进展
综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
英文缩略词表
致谢
