Dkk1在肿瘤诊断中的潜在应用及其在肿瘤微环境中的作用

摘要

为获得与肝细胞癌发生发展相关的基因，本室通过cDNA芯片技术比较了肝细胞癌组织及相对应的癌旁组织基因表达差异。从有较大表达差异的基因中选取了一个在肝癌组织中高表达的基因Dkkl进行研究。进一步通过Northernblot方法，分析了Dkkl在12例肝癌组织和相对应的癌旁组织的表达情况，结果显示Dkkl在7例肝癌组织中有表达，而对应的癌旁组织未检测到Dkkl的表达。 Dkkl是一个分泌性糖蛋白，它对胚胎时期神经的发育起重要作用，肝癌发生后再次表达出来。首先，我们采用RT-PCR、荧光定量PCR、Westernblot和酶联免疫吸附实验在多种人恶性肿瘤细胞系中对Dkkl的表达情况进行了检测分析。RT一PCR、荧光定量PCR、Westernblot均能在10种不同肿瘤类型的人恶性肿瘤细胞系检测到Dkkl的存在。进一步用酶联免疫吸附实验检测到Dkkl蛋白在19种人恶性肿瘤细胞系的培养上清中有表达，蛋白表达量波动于5ng/ml～210ng/ml之间。 目前，诊断和筛选肝细胞癌的主要方法是通过超声影像和血清AFP检测。那么Dkkl是否可以作为一个肝癌的肿瘤标志物呢?我们应用酶联免疫吸附实验检测了18例正常人、14例肝硬化病人、128例肝癌病人血清中Dkkl的浓度。结果显示Dkkl在部分肝细胞癌病人血清中有较高表达，但各组间无统计学差异。统计学无差异可能与样本量少，变异性大有关。 Dkkl作为Wnt通路的一个抑制性蛋白在肝癌组织中高表达，提示该蛋白在肝癌发生发展中可能发挥着重要作用。通过在细胞培养液中加入Dkkl的重组蛋白或抗Dkkl的多克隆抗体来观察它们对肝癌细胞株SMMC一7721生长的影响。发现它们对肝癌细胞株生长没有促进或抑制作用。在细胞培养液中加入Dkkl的重组蛋白对T淋巴细胞的增殖也没有影响。同时，我们筛选出一段对Dkkl有下调作用的RNA干扰序列，为进一步研究Dkkl的功能奠定基础。

目录

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前 言

第一部分Dkk1在肿瘤诊断中的应用

第一节：Dkk1在多种人肿瘤细胞株表达情况分析

实验材料与方法

结果

讨论

小结

第二节Dkk1在肝癌病人诊断中的应用

实验材料与方去

结果

讨论

小结

第二部分Dkk1在肿瘤微环境中作用的初步研究

第一节：Dkk1对SMMC-7721细胞生长的影响

实验材料与方法

结果

讨论

小结

第二节：Dkk1对T淋巴细胞增殖的影响

实验材料与方去

实验结果

讨论

小结

第三节：对Dkk1有效的RNAi干扰片断的筛选

实验材料与方去

实验结果

讨论

小结

参考文献

综述：性激素与肝癌关系的研究进展

致谢