幽门螺杆菌鞭毛素基因flaA、flaB的克隆、表达和其融合蛋白免疫反应性的研究

摘要

目的:鞭毛是Hp定植及持续感染的首要条件之一,可使Hp在粘性环境中也表现出很强的移行能力,还能诱导促炎细胞因子IL-8的分泌及增加Hp感染部位的炎症反应.鞭毛蛋白由两个鞭毛素基因(flaA和flaB)编码的FlaA、FalB蛋白多聚体组成.该文采用高保真PCR从临床分离菌株HpY06中分别扩增全长的flaA和flaB基因,T-A克隆测序后构建原核表达系统pET32a(+)-flaA-BL21DE3和pET32a(+)-flaB-BL21DE3,用不同浓度的IPTG诱导FlaA、FlaB融合蛋白表达,SDS-PAGE检测FlaA、FlaB融合蛋白分子量,并用western blot、免疫双扩散试验和ELISA试验证实了融合蛋白的抗原性和免疫反应性.结论:该实验成功地从Hp临床菌株中构建了flaA和flaB高效原核表达系统,所表达的融合蛋白均有良好的抗原性和免疫反应性,可作为Hp基因工程疫苗和免疫诊断试剂盒的抗原.

目录

ABSTRACT

前 言

第一部分幽门螺杆菌的培养

第二部分幽门螺杆菌基因组DNA的提取

第三部分聚合酶链反应扩增幽门螺杆菌鞭毛素基因flaA、flaB

第四部分T-A克隆、测序与表达载体的构建

第五部分:融合蛋白的表达与纯化

第六部分融合蛋白免疫反应性和抗原性的研究

第七部分ELISA检测

讨 论

参考文献

综述：幽门螺杆菌疫苗候选抗原研究进展

致谢